7.1.3.17.2 액체크로마토그래프를 사용하는 방법

가. 시험법 적용범위과일류, 채소류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 메탄올로 추출한 후 교환수지 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 물

3) Amberlite XAD-2 : 특급

4) 양이온교환수지(200～400메쉬(mesh) Dowex 50W-X8(Bio-Rad)) : 12 × 200 mm의 유리관에 0.2 N 수산화나트륨용액을 사용하여 양이온교환수지 50%의 현탁용액을 만들어 이 중 6 mL로 충전한다. 여기에 1 N 염산 15 mL를 유출시켜 수지의 형태를 H ＋로 만들고 잔류산을 제거하기 위해 충분히 물로 씻어준다. 이 위에 Amberlite XAD-21 g을 충전시키고 물 20 mL로 씻어준다.

5) 음이온 교환수지(50～100메쉬(mesh) Dowex 1-X8) : 미리 만든 양이온교환수지 위에 50%의 Dowex 1 현탁액을 4 mL 넣는다.

6) 테트라메틸암모늄 하이드록사이드(TMAH) : 특급

7) 기타시약 : 특급

8) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 50 mg/L가 되게 한다.

9) 표준용액 : 표준원액 이동상에 희석하여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 메탄올 200 mL를 넣어 1분간 흔들어 섞어 추출한 후 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 이 용액을 2～3 mL 정도되게 농축시키고 물로 4 mL로 맞춘다.

2) 정제
이 용액 중 2 mL를 취하여 미리 준비된 교환수지에 옮기고 물로 14 mL되게 용출하여 받는다. 이 용출액을 수산화나트륨으로 pH를 4로 맞추고 전체부피를 15 mL로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼충전제 : Whatman Partisil SAX 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 : 4.6 mm × 250 mm 또는 이와 동등한 것

다) 이동상 : 메탄올과 물(80 : 20)의 혼합액으로서 0.1 M 초산과 TMAH로 pH를 정확히 4.8로 맞춘 것

라) 검출파장 : 313 nm

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.