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식품 및 식품첨가물공전
7.1.3.18 메토프렌(Methoprene)
가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.
다. 장치
1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)
2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물(90 : 10)의 혼합액을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.
5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO
4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine), C 18(octadecyl bonded silica)
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
마. 시험용액의 조제
1) 추출
시료 50 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 30mL를 넣고 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10～15 g을 넣고 흔들어 섞는다. 정치하여 아세토니트릴층과 물층을 분리시킨 후 아세토니트닐층을 무수황산나트륨에 통과하여 탈수시킨 후 아세토니트릴을 넣어 100 mL로 정용하였다.
2) 정제
‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 8 mL를 취하여 무수황산마그네슘 900 mg과 1차 2차 아민 150 mg, C 18150 mg이 미리 담겨져 있는 원심분리용 튜브에 넣고 1분간 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 전량 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물을 아세토니트릴로 다시 녹여 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.
바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프의 분석조건
가) 컬럼 : C18(Kinetex, 2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 : 40℃
다) 이동상 : 아세토니트릴과 10 mM 인산염 함유 물(90 : 10)의 혼합액
라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분
마) 검출파장 : 265 nm
바) 주입량 : 10 μL
2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
3) 표준품의 크로마토그램
그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.
메토프렌
4) 정량한계
0.04 mg/kg
사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 메토프렌을 확인한다.
1) 액체크로마토그래프-질량분석기
가) 컬럼 : C18(Kinetex 2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 : 40℃
다) 이동상 : 5 mM 초산암모늄 및 0.1% 포름산 함유 메탄올과 5 mM 초산암모늄 및 0.1% 포름산 함유 물(95 : 5)의 혼합액
라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분
마) 주입량 : 5 μL
바) 이온화 : ESI positive-ion mode
사) 분자량 범위 : 50～400m/z
아) Cone voltage : 65 V
분석성분
(Compound)
분자량
(MW)
관측질량
(Exact mass)
선구이온
(Precursor ion,m/z)
생성이온(Product ion,m/z)
충돌 에너지
(Collision energy, eV)
메토프렌
(Methoprene)
310.4
310.2
279
191
13
237
11
219
11
4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine), C 18(octadecyl bonded silica)
시료 50 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 30mL를 넣고 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10～15 g을 넣고 흔들어 섞는다. 정치하여 아세토니트릴층과 물층을 분리시킨 후 아세토니트닐층을 무수황산나트륨에 통과하여 탈수시킨 후 아세토니트릴을 넣어 100 mL로 정용하였다.
‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 8 mL를 취하여 무수황산마그네슘 900 mg과 1차 2차 아민 150 mg, C 18150 mg이 미리 담겨져 있는 원심분리용 튜브에 넣고 1분간 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 전량 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물을 아세토니트릴로 다시 녹여 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
0.04 mg/kg
분석성분
(Compound)
분자량
(MW)
관측질량
(Exact mass)
선구이온
(Precursor ion,m/z)
생성이온(Product ion,m/z)
충돌 에너지
(Collision energy, eV)
메토프렌
(Methoprene)
310.4
310.2
279
191
13
237
11
219
11