7.1.3.22 피레트린(Pyrethrins)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil) : 컬럼크마토그라피용 플로리실(149～150 μm)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 응고액 : 염화암모늄 5 g 및 인산 10 mL에 물을 넣어 400 mL로 한다.

5) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 곡류 및 두류시료 10 g을 정밀히 달아 물 20 mL를 넣고 2시간 방치한 후 추출 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞어 추출한 후 3,000 rpm에서 약 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액을 취한다. 침전물에 아세톤 50 mL를 넣고 2분간 흔들어 섞은 후 위와 같이 되풀이하여 원심분리한다. 상층액을 합쳐 40℃ 이하에서 아세톤을 감압 농축하여 거의 날려보낸다. 물층을 미리 헥산 100 mL 및 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층을 삼각플라스크에 취한다. 물층에 헥산 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 헥산층에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 헥산 50 mL씩으로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 헥산을 감압 농축하여 거의 날려보낸다. 잔류물에 헥산 10 mL 및 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 분액깔때기에 취한다. 헥산층에 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 아세토니트릴층을 위의 분액깔때기에 합친다. 이에 15% 염화나트륨용액 400 mL 및 헥산 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 헥산 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 헥산층에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 헥산 50 mL로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 감압 농축하여 5 mL로 농축한다.

나) 채소류, 과일류, 견과종실류시료 약 20 g을 달아 추출 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞어 추출한 후 3,000 rpm에서 약 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액을 취한다. 침전물에 아세톤 50 mL를 넣고 동일한 방법으로 2분간 추출한 후 위와 같이 되풀이하여 원심분리한다. 상층액을 합쳐 40℃ 이하에서 약 50 mL로 감압 농축한다. 이에 응고액 50 mL 및 여과보조제 약 5 g을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 30분간 방치한 후 3,000 rpm에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액을 취한다. 침전물에 아세톤 25 mL및 응고액 25 mL를 넣고 1분간 흔들어 섞은 후 위와 같이 되풀이하여 원심분리한다. 상층액을 합쳐 미리 헥산 100 mL 및 포화염화나트륨용액 150 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층을 위의 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 헥산 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 헥산층에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 헥산 50 mL로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 약 5 mL로 감압 농축한다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 300 mm의 컬럼관에 플로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 10 g을 각각 헥산에 현탁시켜 층전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 헥산 50 mL로 유출시켜 버린 후 에틸아세테이트 : 헥산(1 : 1) 혼합액 100 mL로 용출하여 받는다. 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 날려 보낸다. 잔류물을 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : 안지름 0.53 mm, 길이 30 m의 모세관 유리 컬럼에 기체크로마토그래프용 메틸실리콘을 1.5 μm두께로 코팅한 것

나) 주입부 및 검출기 온도 : 270～300℃

다) 오븐 온도 : 초기의 온도 50℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 15℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 150℃에서 5분간 유지한 후 8℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 230℃에서 4분간 유지하고 다시 25℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 280℃에서 15분간 유지한다.

라) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 피레트린 Ⅰ이 23분 50초에서, 피레트린 Ⅱ가 약 29분 40초에서 유출하는 유속으로 조정한다.

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피레트린 Ⅰ 및 피레트린 Ⅱ 각각에 대하여 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량하여 피레트린 Ⅰ 및 피레트린 Ⅱ를 합하여 피레트린 함량을 구한다.

자. 확인시험정성시험과 똑같은 조건에서 기체크로마토그래프-질량분석을 하였을 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다. 또한 필요하면 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.