7.1.3.24트리포린(Triforine)

가. 시험법 적용범위곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO 4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 등 건조 시료의 경우 물 5 mL를 넣고 20분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣어 15분간 흔들어 섞은 후 황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산삼나트륨 · 2수화물 1 g, 구연산이나트륨 · 1.5수화물 0.5 g을 넣고, 1분간 강하게 흔들어 섞고, 3,000 rpm에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 1차 2차 아민 25 mg이 미리 담겨져 있는 1.5 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 중 상층액 1 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 물과 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(70 : 30)의 혼합액에서 2분간 유지 후 0.1% 포름산 함유 물과 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴(10 : 90)의 혼합액으로 2분간 직선적으로 농도 구배하고 1분간 유지한다.

다) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

라) 컬럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) 분자량 범위 : 100～500m/z

아) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
트리포린 (Triforine)	4.1	435.0	435	390	15
				215	30

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 390 ( m/z) 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

트리포린(4.1분)

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 트리포린을 확인한다.