7.1.3.26 비페녹스(Bifenox)

가. 시험법의 적용범위곡류, 두류, 과일류, 채소류 등식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출하고 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 아세톤 40 mL로 잔류물 및 용기를 씻어 내려 앞서의 여과액과 합한다. 합한 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 : 디클로로메탄(80 : 20) 혼합액 100 mL를 차례로 넣은 후 5분 이상 흔들어 섞는다. 정치하여 층을 분리시킨 후 유기용매층을 무수황산나트륨층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 건고한다. 잔류물에 아세토니트릴포화헥산 40 mL를 넣어 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 분액깔때기에 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충전한 후 헥산 100 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 헥산 10 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산 : 디클로로메탄(90 : 10) 혼합액 150 mL과 헥산 : 디클로로메탄(60 : 40) 혼합액 150 mL를 차례로 넣어 유출시켜 버린다. 계속하여 디클로로메탄 : 헥산 : 아세토니트릴(50 : 49.5 : 0.5) 혼합액 150 mL를 넣어 용출하여 받아 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물에 헥산 10 mL를 넣어 잘 녹여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-1(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 10 mL/분

다) 주입부 온도 : 250℃

라) 오븐 온도 : 140℃에서 시험용액을 주입하고 4℃/분의 비율로 온도를 240℃까지 상승시키고 10℃/분의 비율로 280℃까지 상승

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입부 : 직접주입법

사) 주입량 : 1 μL

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

비페녹스(19.7분)

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 비페녹스를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : DB-1MS(50 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 2 mL/분

다) 주입부 온도 : 260℃

라) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 10℃/분의 비율로 온도를 220℃까지 상승시켜 3분간 유지한 후 다시 3℃/분의 비율로 240℃까지 상승시키고 20℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 15분간 유지한다.

마) 인터페이스 온도 : 300℃

바) 이온원 온도 : 230℃

사) 주입부 : Split mode(30 : 1)

아) 주입량 : 1 μL

자) 분자량 범위 : 50～500m/z차) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
비페녹스 (Bifenox)	21.1	342.1	311, 341, 343