7.1.3.27 피리프록시펜(Pyriproxyfen)

가. 시험법 적용범위곡류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출하고 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 :
표준원액을 아세토니트릴 : 물(90 : 10) 혼합액에 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합친다. 합친 여과액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 450 mL 및 디클로로메탄 : 헥산(10 : 90) 혼합액 100 mL를 넣어 1분 이상 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄 : 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다. ※ 지방성 시료의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충전한 후 헥산 50 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 : 헥산(25 : 75) 혼합액 100 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 에틸아세테이트 : 헥산(5 : 95) 혼합액 150 mL를 넣어 용출하여 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 아세토니트릴 : 물(90 : 10) 혼합액 10 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 아세토니트릴과 물(85 : 15)의 혼합액

다) 이동상 유속 : 1 mL/분

라) 컬럼 온도 : 30℃

마) 검출파장 : 230 nm

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

피리프록시펜(8.9분)

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피리프록시펜을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.0 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 5 mM 아세트산암모늄 함유 아세토니트릴과 5 mM 아세트산암모늄 함유 물(85 : 15)의 혼합액

다) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

라) 컬럼 온도 : 30℃

마) 이온화 : ESI positive-ion mode

바) 주입량 : 5 μL사) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
피리프록시펜 (Pyriproxyfen)	5.4	321.4	322