가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 디클로로메탄과 헥산의 혼합액으로 액-액 분배하고 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 내부표준원액 : 디메틸엘로우(Dimethyl yellow[4-(dimethoxyamino) azobenzene)]) 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 에틸아세테이트에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석하고 내부표준물질의 농도는 0.4 mg/L가 되도록 혼합하여 에틸아세테이트에 조제한다.

6) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 아세톤 40 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한 후 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣은 후 디클로로메탄 : 헥산(20 : 80) 혼합액 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 하층 수용액층을 버리고 유기용매층을 취한다. 유기용매층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 아세톤에 녹인 1% 디에틸렌 글리콜 0.5 mL를 넣고 30℃ 이하에서 약 3 mL가 남을 때 까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리컬럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 충전하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식 충전한 후 헥산 25 mL를 넣어 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 ‘1) 추출’에서 얻은 헥산용액 10 mL를 넣은 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려보낸 후 여분의 헥산 5 mL로 용기 및 컬럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 아세톤 : 헥산(2 : 98) 혼합액 50 mL를 넣어 용출하고, 용출액에 아세톤에 녹인 1% 디에틸렌글리콜 0.5 mL를 넣은 후 30℃ 이하에서 약 3 mL가 남을 때가지 농축한 후 이어서 질소가스를 사용하여 건고한다. 건고한 잔류물에 내부표준물질인 0.4 mg/L의 디메틸엘로우(dimethyl yellow)가 함유된 에틸아세테이트를 넣어 최종 부피가 5 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 50℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고 10℃/분의 비율로 온도를 250℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 250℃

마) 검출기 온도 : 300℃

바) 주입량 : 1 μL, splitless

2) 검량선 작성
농도별로 조제한 검량용 표준용액(내부표준물질 포함)을 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상에서 각 대상성분 피크의 면적 또는 높이의 내부표준물질에 대한 비율을 계산하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

A : 몰리네이트(13.8분), B : 디메틸 옐로우(20.8분, 내부표준물질)

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 몰리네이트를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 2 mL/분

다) 오븐 온도 : 50℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고 10℃/분의 비율로 온도를 250℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입부 온도 : 250℃

마) 인터페이스 온도 : 290℃

바) 분자량 범위 : 100～350m/z

사) 주입량 : 1 μL, splitless아) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
몰리네이트 (Molinate)	13.6	187.3	187.1	126, 187