7.2.1.2델타메트린(Deltamethrin), 디에토펜카브(Diethofencarb), 사이퍼메트린(Cypermethrin), 아족시스트로빈(Azoxystrobin), 톨릴플루아니드(Tolylfluanid), 톨클로포스메틸(Tolclofos-methyl), 피리메타닐(Pyrimethanil), 펜헥사미드(Fenhexamid)

가. 시험법 적용범위수삼, 건삼, 홍삼, 홍삼농축액, 인삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 GC측정농약은 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정하고 LC측정농약은 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD), 질소․인 검출기(GC-NPD) 또는 불꽃광도검출기(GC-FPD), 질량분석기(GC-MSD)

2) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 플로리실(Florisil) 및 아미노프로필 카트리지(amino-propyl cartridge) : 플로리실(500 mg) 및 아미노프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 각각 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

5) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(건조삼 10 g, 수삼 40 g, 인삼농축액 5 g)를 정밀히 달아 추출용기에 넣고[건조삼은 물 30 mL를 넣고 2시간 방치, 인삼농축액은 물 30 mL 및 여과보조제(Celite 545) 10 g을 넣고] 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2～3분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 여과액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL의 분액깔때기에 담고 마개(Teflon-lined)를 막은 후 1분간 강하게 흔들어 섞는다. 이를 약 1시간 정치하여 층을 분리시키고 아세토니트릴층과 물층을 분리시킨다. 주1) 용매추출액을 저온에서 정치하면 층 분리가 빨라질 수 있음.

2) 농축

가) GC 측정농약1)의 상층액(아세토니트릴층) 20 mL를 50 mL의 비커에 취하여
40℃ 이하에서 공기 또는 질소가스를 통과시키면서 용매가 소량 남을 때까지 날려 보낸다. 다시 20% 아세톤 함유 헥산 2 mL를 넣고 교반하여벽면의 잔류물을 완전히 녹인다.

나) 액체크로마토그래프 측정농약1)의 상층액(아세토니트릴층) 20 mL를 50 mL의 비커에 취하여 40℃ 이하에서 공기 또는 질소가스를 통과시키면서 용매가 소량 남을 때까지 날려 보낸다. 다시 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL를 넣고 교반하여 벽면의 잔류물을 완전히 녹인다.

3) 정제

가) GC 측정 농약미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초 정도의 속도로유출시켜버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출시켜 버린다. 이어서 2) 농축 가) GC 측정농약 항의 녹인 액을 카트리지에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모으고 내부표준물질을 넣는다. 용출액은40℃ 이하에서질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.주2) 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

나) 액체크로마토그래프 측정 농약미리 아미노-프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초 정도의 속도로유출시켜버린다. 이 카트리지에 2) 농축 나) 액체크로마토그래프 측정농약 항의 녹인 액을 카트리지에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로용출하여시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL로 용출하여 동일 시험관에 모으고 내부 표준물질을 넣는다. 용출액은40℃ 이하에서질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 메탄올(액체크로마토그래프 대상농약은 아세토니트릴)에 녹여 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) GC-ECD

(1) 컬럼 : DB-5 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분

(3) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃(DB-17의 경우 270℃)까지 온도를 상승시켜 10분 이상(DB-17의 경우 15분 이상) 유지한다.

(4) 주입부 : Split mode(50 : 1), 260℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

나) GC-NPD

(1) 컬럼 : DB-5 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분

(3) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃(DB-17의 경우 270℃)까지 온도를 상승시켜 10분 이상(DB-17의 경우 15분 이상) 유지한다.

(4) 주입부 : Splitless mode, 260℃

(5) 검출기 온도 : 280℃

다) GC-FPD

(1) 컬럼 : DB-5 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분

(3) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

(4) 주입부 : Splitless mode, 250℃

(5) 검출기 온도 : 220℃

라) GC-MSD

(1) 컬럼 : DB-5MS 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 0.9 mL/분

(3) 오븐 온도 : 100℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 15분 이상 유지한다.

(4) 주입부 : Split mode(10 : 1), 260℃

(5) 인터페이스 온도 : 280℃

2) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 액체크로마토그래프

(1) 컬럼 : Nova-pak C18(4.6 mm × 250 mm) 또는 이와 동등한 것

(2) 검출파장 : 254 nm

(3) 이동상 : 아세토니트릴과 물(70 : 30)의 혼합액

(4) 이동상 유속 : 1 mL/분

3) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

사. 정성시험위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 분석조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.주3) GC-MSD상의 머무름 시간(retention time) 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.