7.2.2.3 카벤다짐(Carbendazim)

가. 시험법 적용범위수삼, 건삼, 홍삼, 인삼농축액, 홍삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 메탄올로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD) 또는 형광검출기(HPLC-FLD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에 보관하여 사용한다.

4) 여과보조제 : 셀라이트 545(Celite 545) 또는 하이플로슈퍼셀(Hyflo Super Cel) 또는 이와 동등한 것

5) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(수삼은 50 g을 정밀히 달고, 건조삼은 10 g을 정밀히 달아 이에 물 40 mL를 넣고 약 1시간 방치, 인삼농축액은 10 g을 정밀히 달아 이에 물 40 mL를 넣는다.)를 추출용기에 넣고 메탄올 200 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지 위에 셀라이트 545를 1 cm 두께로 깔은 흡인여과기로 여과한다. 수삼 및 건조삼의 잔류물은 다시 추출용기에 넣고 메탄올 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 위와 같이 되풀이하여 여과하고 인삼농축액은 아세톤 소량으로 흡인여과기 위의 잔류물을 씻어 여과액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압하에 용매를 날려 버리고 남은 용액을 분액깔때기에 옮긴다. 농축용플라스크를 0.1 N 염산 25 mL 및 물 소량으로 잘 씻고 이 씻은 액은 분액깔때기에 합친다. 이에 헥산 50 mL를 넣고 1분간 천천히 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시키고 헥산층은 버린다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 층을 분리시켜 헥산층은 버린다. 물층을 200 mL의 비커에 옮겨 1 N 수산화나트륨용액으로 pH를 6～7로 맞춘 후 분액깔때기로 옮긴다. 이에 에틸아세테이트 50 mL 씩으로 2회 강하게 흔들어 섞은 후 에틸아세테이트층을 합하여 40℃ 이하에서 감압하에 약 50 mL로 농축하고 다시 분액깔때기에 옮겨 0.1 N 염산 25 mL를 넣고 약 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 물층을 200 mL의 비커에 옮긴다. 에틸아세테이트층은 다시 0.1 N 염산 25 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 물층을 앞의 비커에 합쳐 1 N 수산화나트륨용액으로 pH를 6～7로 조정한 후 분액깔때기로 옮긴다. 이에 에틸아세테이트 50 mL씩으로 2회 강하게 흔들어 섞은 후 에틸아세테이트층을 합하여 40℃ 이하에서 감압하에 용매를 날려버리고 잔류물을 디클로로메탄 2 mL에 녹인다.

2) 정제
활성화한 실리카 카트리지(Sep-pak 또는 이와 동등한 것∶1 g)에 위의 녹인액을 넣고 카트리지에 흡착시킨 후 디클로로메탄 20 mL로 유출시켜 버리고 이어서 디클로로메탄 : 에틸아세테이트(90 : 10) 혼합액 6 mL를 용출하여 용출액을 40℃ 이하에서 감압하에 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 메탄올에 녹여 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼충전제 : μ-Bondapak C18또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 : 안지름 3～5 mm, 길이 25～50 cm의 스테인리스관

다) 이동상 : 0.01 M 인산완충용액(0.01 M KH2PO4와 0.01 M Na2HPO4를 혼합하여 pH 7로 조정)과 메탄올(40 : 60)의 혼합액

라)검출파장 : 형광검출기 여기파장 280 nm, 형광파장 315 nm, 자외부검출기 UV 282 nm

마) 이동상 유속 : 1 mL/분

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 표준용액 및 시험용액을 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 어느 분석조건에서도 그 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험에서 얻어진 결과를 근거로 적절한 컬럼충전제를 써서 기체크로마토그래프를 하여 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라서 정량한다.