7.3.1.3 클로르단(Chlordane), 사이퍼메트린(Cypermethrin), 델타메트린(Deltamethrin), 에트림포스(Etrimfos), 펜발러레이트(Fenvalerlate), 퍼메트린(Permethrin), 포사론(Phosalone), 피리미포스메틸(Pirimiphos methyl)

가. 시험법 적용범위가금류고기, 가금류부산물, 달걀, 닭고기, 소고기, 알, 양고기, 우유, 유, 포유류고기, 포유류부산물 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리시료를 석유에테르 또는 헥산으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프 : 전자포획검출기(GC-ECD) 및 질량․인 검출기(GC-NPD) 또는 불꽃광도검출기(GC-FPD)

2) 기체크로마토그래프․질량분석기(GC/MSD)를 사용한다.

3) 액체크로마토그래프 : 자외선흡광검출기(HPLC-UVD) 또는 형광검출기(HPLC-FLD)를 사용한다.

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것 3) 표준원액 : 각각의 농약 표준품을 헥산 또는 아세톤 등에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 4) 표준용액 : 표준원액을 일정량 취하여 헥산 또는 아세톤으로 희석하여 사용한다.

마. 시험용액의 조제대부분의 분석 검체는 많은 지방을 함유하고 있으므로 우선 지방(농약포함)을 추출한 다음 지방에서 농약을 분리하여 추출한다. 농약은 지방중 또는 전체 중량중으로 측정한다. 지방 함유 검체 중 지방의 함량이 적은 검체는 시료량을 적게 취하여 비지방성 식품에 따라 시험할 수 있다. 이 경우는 지방을 따로 분리하지 않고 직접 정제하며 잔류량은 전체 중량으로 측정한다.

1) 추출
균질화한 고기류 30～50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 취하고 무수황산나트륨 약 50 g을 넣어 혼합한 후 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 넣어 5분 강하게 흔들어 추출한 후 여과보조제(Celite 545)를 깔은 부흐너깔때기에서 감압 여과한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여과액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃이하에서 감압하여 용매를 날려버린다. 한편 우유(40 mL) 및 알(30 g)은 추출용기에 취하고 아세톤 100 mL를 넣어 3분 동안 강하게 흔들어 추출한 후 여과보조제를 깔은 부흐너깔때기에서 흡인 여과한다. 잔류물은 아세톤 50 mL로 재추출하여 위의 여과액과 합쳐 분액깔때기에 옮기고 물 50 mL와 헥산 100 mL를 넣어 강하게 흔들어 섞은 다음 헥산층을 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하고 위의 헥산층과 합하여 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 헥산 또는 석유에테르 25 mL에 녹여 분액깔때기(I)로 옮기고 헥산 또는 석유에테르 포화 아세토니트릴 50 mL를 넣어 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 아세토니트릴층을 취한다. 아세토니트릴층은 다시 물 200 mL와 포화염화나트륨용액 40 mL가 들어있는 분액깔때기(II)에 옮긴다. 분액깔때기(I)의 헥산 또는 석유에테르층에 다시 헥산 또는 석유에테르 포화 아세토니트릴 50 mL를 넣어 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 아세토니트릴층을 위의 분액깔때기(II)에 합한다. 여기에 헥산 100 mL를 넣어 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산층을 취하고 다시 헥산 100 mL를 넣어 이와 같이 되풀이한 후 위의 헥산층에 합한다. 헥산층은 무수황산나트륨으로 탈수한 다음 40℃이하에서 감압하여 용매를 날려 버리고 소량 남은 용액은 질소가스를 이용하여 농축한다.

2) 정제

가) 아세토니트릴 분배 : 3 g 이하의 지방을 달아 125 mL의 분액깔때기(Ⅰ)에 넣고 석유에테르를 넣어 지방과의 총량이 15 mL 정도가 되게 한다. 이에 석유에테르포화아세토니트릴(petroleum ether saturated acetonitrile) 30 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리한다. 아세토니트릴층을 물 650 mL, 포화염화나트륨 40 mL 및 석유에테르 100 mL가 이미 들어있는 1 L의 분액깔때기에 넣는다. 다시 분액깔때기(Ⅰ)에 석유에테르포화아세토니트릴(petroleum ether saturated acetonitrile) 30 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리한다. 이 조작을 2회 되풀이한 후 아세토니트릴층을 앞의 1 L의 분액깔때기에 합한다. 이어서 1 L의 분액깔때기를 수평으로 하여 30～45초간 강하게 흔들어 섞은 후 층을 분리하고 물층은 다른 1 L의 분액깔때기에 옮기고 여기에 석유에테르 또는 헥산 100 mL를 넣고 15초간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리하고 물층은 버린다. 석유에테르층은 앞의 석유에테르층과 합하여 물 100 mL씩으로 2회 가볍게 흔들어 씻고 석유에테르층은 안지름 25 mm, 길이 50 mm의 무수황산나트륨컬럼을 통과하여 탈수한 후 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기에 넣는다. 컬럼을 석유에테르 30 mL씩으로 3회 씻고 씻은 액은 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기에 합하여 약 10 mL 정도로 농축한 후 플로리실 컬럼으로 옮긴다. 어류 등과 같이 이 방법에 의해 정제효과가 떨어지는 시료 등은 분배한 아세토니트릴층을 모두 모아 아세토니트릴 포화 석유에테르 30 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 물 650 mL, 포화염화나트륨 40 mL 및 석유에테르 100 mL가 들어있는 1 L의 분액깔때기에 넣고 위의 조작을 반복한다(미량 남아있는 지방을 제거하기 위함).

나) 플로리실 정제 : 안지름 22 mm의 컬럼에 40～50 mL의 석유에테르 또는 헥산을 넣고 활성화시킨 플로리실을 컬럼 길이의 10 cm정도 되게 충전한 후 그 위에 컬럼 길이의 1 cm정도 되게 무수황산나트륨을 넣는다. 컬럼의 상단에 소량의 용매가 남을 정도로 유출시켜 버리고 이어서 위의 농축액을 컬럼에 넣고 용기를 소량의 석유에테르 또는 헥산으로 2회 씻어 컬럼에 넣어 약 5 mL/분의 속도로 흘려버리고 컬럼의 기벽을 소량의 석유에테르 또는 헥산으로 씻어준다. 이어서 6% 에테르 함유 석유에테르 또는 6% 에테르 함유 헥산의 혼합액 200 mL를 5 mL/분의 속도로 용출하여 받고, 용기를 바꾼 후 15% 에테르함유 석유에테르 또는 15% 에테르 함유 헥산의 혼합액 200 mL를 5 mL/분의 속도로 용출하여 받는다. 다시 용기를 바꾼 후 50% 에테르 함유 석유에테르 또는 50% 에테르 함유 헥산의 혼합액 200 mL를 5 mL/분의 속도로 용출하여 받아 각각의 용출액을 감압하에 5 mL 이하의 일정량으로 농축하여 시험용액으로 한다. 15%, 50% 혼합의 용출액(두번째, 세번째 용출액) 특히 지방성시료의 15% 용출액을 유도체화, 기체크로마토그래피, 박층크로마토그래피법 등을 하기 위해서는 산화마그네슘 정제 또는 알칼리 가수분해를 거쳐야 하며 두 가지를 동시에 해야 할 경우에는 알칼리 가수분해 후 산화마그네슘 정제를 행한다.

※ 동물성 식품(지방조직, 근육조직 등)은 GPC, Unitrax 등의 장비를 사용하여 자동으로 전처리하는 방법을 사용할 수 있다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 충전컬럼(Packed column)

(1) 고정상담체 : 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW
-DMCS) 및 가스크롬 Q(60～80메쉬(mesh), 80～100메쉬(mesh)) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체 : 100% methyl siloxane, 50% phenyl 50% methyl siloxane, 50% cyano propylphenyl 50% methyl siloxane, 2% DEGS(stabilized)를 3～5%로 입힌 것 또는 이와 동등한 것(7. 식품중 잔류농약 시험법 7.1.2.1의 바. 시험조작중 ｢ 사용이 가능한 동등한 컬럼｣ 참조)

(3) 컬럼 : 안지름 2～5 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

나) 모세관 컬럼(capillary column) : 안지름 0.2～0.32 또는 0.53 mm의 안지름을 가지는 30 m의 모세관 유리 컬럼에 적합한 고정상액을 화학결합 또는 교차결합(cross-link)하여 코팅한 것

다) 주입부 및 검출기 온도 : 각각 220℃, 250℃

라) 오븐 온도 : 130～230℃사이에서 항온(필요에 따라서 적절히 조절한다)승온 : 측정농약의 종류 및 기기상태에 따라 적절히 조절한다.

마) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2) 또는 헬륨(He)을 적절하게 조절한다.

바) 검출기의 가스유량(FPD, NPD) : 수소와 공기를 적절히 조절한다(수소 100 mL/분, 공기 130 mL/분).

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

사. 정성시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간(retention time)과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험에서 얻어진 결과를 근거로 적절한 컬럼충전제를 써서 기체크로마토그래피를 하여 피크높이법 또는 피크면적법에 따라서 정량한다.

자. 분석 대상 및 상세조건1) 정체과정 중 용출조건 예시(에테르 %비율, 회수율%)

Acetochlor(15＋50), Alachlor(50), Aldrin(6), Allethrin(50), Anilazine(15＋50), Benfluralin(6), Benoxacor(15＋50), Bensulide(50), BHC(α,β,γ : 6), BHC(δ:6＋15), Bifenox(15＋50), Bifenthrin(6＋15), Binapacryl(15,65%), Bromophos(6), Bromophos-ethyl(6,59~78%), Bromopropylate(15＋50), Captan(50), Carbophenothions(6,60%), Chlobenside(6), Chlobromuron(50,44~100%), Nuarimol(50), Octachlor epoxide(6), Ovex(15), Oxadiazon(15,75%), Parathion methyl(15), Parathion(15), Pentachlorobenzene(6), pentachlorobenzonirile(15,60%), Pentachlorphenyl methyl ester(6), Bifenthrin Cyfluthrin Dimethoate

Chlobufam(15), Chlordane(6), Chlordecone(15＋50), Chlordene(6), Chlornitrofen(6＋15), Chlorobenzilate(15＋50), Chloropropylate(15＋50), Chlorpyrifos(6), Chlorthiophos(6), Cypermethrin(15), DDD(6), DDE(6), DDT(6), DEF(15＋50), Deltamethrin(15,77~80), Dialifor(15,50%), Diazinon(15), Dichlobenil(15), Dichlofop-methyl(15), Pentachlorphenyl methyl sulfide(6), Permethrin(6＋15), Perthane(6), Phosalone(50), Photodieldrin(15＋50), Pirimiphos-ethyl(15＋50), Pirimiphos-methyl(15＋50), Procymidone(15,76%), Profenofos(50,50%), Prometryn(50,70%), Disulfoton Fenpropathrin

Dichlorfenthion(6,69~89%), Dicloran(15＋50,50%), Dicofol(15＋50,61~85%), Dieldrin(15), Dinitramine(15,78~80%), Dinocap(15,60%), Endosulfan(15＋50), Endrin(15), EPN(15), Esfenvalerate(15), Ethalfluralin(6), Ethion(6), Etridiazole(6,68~73%), Etrimfos(15), Fenitrothion(15), Fenoxaprop ethyl ester(50, 65~110%), Fenpropathrin(15,59~ 114%), Propham(15,80%), Prothiofos(6), Pyrethrins(50), Ronnel(6), Simazine(50), Strobane(6), Sulfallate(6＋15), Sulfotep(6＋15,65~70%), Sulphenone(20＋25), Profenofos Pyriproxyfen

Folpet(15＋50,50%), Fonofos(6), Heptachlor & Heptachlor epoxide(6), Hexachlorobenzene(6, 60%), Lactofen(50), Leptopphos(50), Linuron(50,42~62%), Malathion(15＋50), Merphos(6＋15＋50), Methidathion(50,50%), Methoxychlor(6), Mirex(6,75), Nitalin(50,70%), Nitrofen(15), Nitrofluorfen(15), Nonachlor(6), TCMTB(15,61~62%), Tecnazene(6), Tetradifon(15), Tetraiodoethylene(6,65%), Tetrasul(6), Thiobencarb(15,50~86%), Toxaphene(6), Triallate(6), Trichloronat(6), Trifluralin(6), Triazophos

2) 리누론(Linuron)의 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼충전제 : μ-Bondapak C 18또는 이와 동등한 것 나) 컬럼 : 안지름 4.6 mm, 길이 25 cm의 스테인리스관 다) 이동상 : 메탄올과 물을 Gradient 방법으로 사용

라)포스트 컬럼 유도체화 : 유출되어 나오는 성분들을 테프론관을 통과시키면서 UV 빛과접촉시킴으로써 광분해과정을 통해 일차 아민으로 바꾸어준 후 관내부에서 OPA, MERC와 반응시켜 Fluorophore를 만들어줌.

마) 검출기 : 형광검출기(Fluorescence Detector)

3) 포사론(Phosalone)의 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼충전제 : μ-Bondapak C 8또는 이와 동등한 것 나) 이동상 : 아세토니트릴과 물을 gradient 방법으로 사용 다) 검출기 : 형광검출기(Fluorescence Detector)