7.3.2.2.2 다이쾃(Diquat),패러쾃(Paraquat) (제2법)

가. 시험법 적용범위가금류고기, 가금류부산물, 돼지고기, 돼지고기부산물, 돼지신장, 소부산물, 소신장, 소고기, 알, 양고기, 양부산물, 양신장, 유, 포유류고기, 포유류부산물 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리시료를 TCA 용액으로 추출한 후 C18컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 액체크로마토그래프용

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품(Diquat dibromide monohydrate, Paraquat dichloride hydrate)을 각각 물에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 이동상에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 염기성 벤잘코니움(benzalkonium) 용액 : benzalkonium chloride 0.05 g과 암모니아수 0.5 mL를 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

6) 염기성 헵탄설포네이트(heptanesulphonate) 용액 : sodium heptanesulphonate 2 g과 암모니아수 2 mL를 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

7) 산성 메탄올 : 진한 염산 1 mL를 메탄올에 넣어 100 mL가 되게 한다.

8) 25% TCA 용액 : trichloroacetic acid 25 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

9) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
잘게 썰거나 분쇄한 시료 5 g을 취하여 25% TCA 용액 5 mL 및 물 15 mL와 혼합, 2분간 강하게 흔들어 추출한 후 이를 원심분리관에 옮겨 3,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 취한다. 다시 잔류물에 물 20 mL와 25% TCA 용액 2 mL를 넣어 추출 및 원심분리를 하여 앞의 상층액에 합한다. 이 액에 약 0.9 mL의 암모니아수를 넣어 pH가 9～10이 되도록 한다. 이때 침전물이 생길 경우에는 이를 다시 원심분리하여 사용한다.

2) 정제
C18카트리지에 물 5 mL, 메탄올 5 mL, 증류수 5 mL, 염기성 벤잘코니움용액 5 mL, 물 5 mL, 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 염기성 헵탄설포네이트 용액 10 mL 순으로 2～3 방울/초의 속도로 흘려주어 활성화시킨 후, 위의 추출용액을 1방울/초의 속도로 통과시키고 물과 메탄올 각 5 mL로 유출시켜 버린다. 여기에 산성 메탄올 3 mL를 넣어 시험관에 용출하고 질소가스를 사용하거나 감압하여 용매를 모두 날려 보낸다. 잔류물은 액체크로마토 그래프 분석용 이동상 용매 1 mL에 용해하여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : Nova-pak C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출파장 :패러쾃-255 nm, 다이쾃-310 nm

다) 이동상 : 7.5mM(약 1.52 g) sodium heptanesulphonate와 diethylamine 10.3 mL, orthophosphoric acid 6.75 mL를 아세토니트릴 : 물(1 : 9) 혼합액에 녹여 1 L가 되게 한 것

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석에서도 표준 용액 피크의 머무름 시간(retention time)과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.