7.3.2.4 사이로마진(Cyromazine)

가. 시험법 적용범위가금류고기, 알, 양고기, 유 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴 또는 메탄올로 추출한 후 양이온 교환수지 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약

1) 용매 : 잔류농약 시험용 및 액체크로마토그래프용

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 양이온교환수지 : 50～100메쉬(mesh), 200～400메쉬(mesh) Dowex 50W-X4(Bio-Rad)

4) 음이온 교환수지 : 50～100메쉬(mesh) Dowex 1-X8, Cl-form(Aldrich Cat. No. 21,741-7) 물 500 mL와 1 N 수산화나트륨용액 적당량으로 세척하여 활성화시킴(암갈색 pH 7～8).

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

6) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

7) 표준용액 : 표준원액을 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료를 잘게 썰거나 갈은 후 20 g을 추출 용기에 넣고 아세토니트릴 : 물(9 : 1) 혼합액(동물조직의 경우) 또는 메탄올 : 물(9 : 1) 혼합액(달걀의 경우) 200 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 추출한다(달걀의 경우에는 10분간 원심분리한다). 여과를 할 경우 여과지를 사용하여서는 안된다(경우에 따라 여과지 제조공정에서 사이로마진 의 대사산물인 멜라민(melamine)이 함유될 수 있음).

2) 정제
추출액 중 5 g을 20 mL의 주사기를 사용하여 C 18Sep-Pak을 통과시킨 후 양이온교환수지 2 mL가 충전된 Econo컬럼(폴리프로필렌, 0.7×4 cm Bio-Rad # 731-1110)에 서서히 용출시킨다. 이후 Econo 컬럼을 감압장치에 연결하고 0.1 N 염산 50 mL, 메탄올 : 물(9 : 1) 혼합액 50 mL과 메탄올 10 mL를 차례로 흘려 세척한 후 감압장치를 제거한다. 위의 컬럼에 수산화암모늄용액 : 메탄올(1 : 19) 혼합액 20 mL를 흘려주어서 사이로마진을 용출하고 이 용출액을 감압 농축기로 농축, 건고시킨 후 물 10 mL로 녹인다. 50～100메쉬(mesh) Dowex 50W-X4 2 mL를 충전시킨 Econo컬럼 위에 50～100메쉬(mesh) Dowex 1-X8 2 mL를 충전시킨 Econo컬럼을 연결한 후 미리 물 10 mL로 세척하고 위의 용액 10 mL를 흘려준다. 이후 플라스크의 내벽을 5 mL의 물로 세척하여 추가로 흘려준다. 수용액층이 Dowex 50W-X4컬럼을 통과한 후 Dowex 1-X8컬럼을 제거하고 Dowex 50W-X4컬럼을 메탄올 10 mL로 세척하여 메탄올은 버린다. Dowex 50W-X4컬럼에 수산화암모늄용액 : 메탄올(1 : 3) 혼합액 30 mL를 흘려주어서 사이로마진을 용출시키고 이 용출액을 감압 농축기로 농축 건고시킨다. 위의 잔류물을 소량의 메탄올로 녹여 시험용액으로 한다.

라. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 검출파장 : 214 nm

나) 컬럼 : Zorbax-NH2(4.6 mm × 250 mm) 또는 LiChrosorb-NH2(4.0 mm × 25 mm)

다) 이동상 : 아세토니트릴과 물(19 : 1)의 혼합액

라) 유속 : 1.0 mL/분

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머

무름 시간(retention time)과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.주1) 위 방법으로 멜라민(Melamine)의 동시분석도 가능