7.3.2.8 프로클로라즈(Prochloraz)

가. 시험법의 적용범위

소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리시료 중 프로클로라즈와 대사산물(BTS 44595, BTS 44596, 2,4,6-트리클로로페놀)을 pyridine hydrochloride를 사용하여 2,4,6-트리클로로페놀로 변환 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 2,4,6-트리클로로페놀(2,4,6-trichlorophenol; 2,4,6-TCP) 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 에틸아세테이트를 이용하여 적당한 농도로 희석한다.

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 고기류 등 지방 많이 함유한 검체: 균질화한 시료 10 g을 정밀히 달아 아세톤 100 mL를 넣은 뒤 30분간 추출하고 흡입 여과한다. 아세톤 50 mL로 잔류물과 흡입 여과에 사용한 용기를 씻어 합한 후 감압 농축하고 1% 포름산 함유된 n-헥산 : 아세토니트릴(1 : 1) 혼합액 50 mL를 넣고 분배 추출을 2회 반복 후 하층을 모아 감압 농축한다. 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 녹인 후 질소가스를 사용하여 1 mL로 농축한 뒤, 2)의 과정으로 진행한다.

나) 알과 유: 균질화한 시료 10 g을 정밀히 달아 아세톤 20 mL를 넣고 30분간 추출하고 3,500 rpm으로 5분간 원심분리한다. 상층액을 전량 취한 후 물 100 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣고 디클로로메탄 50 mL로 2회 분배 추출한 후 하층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 다음 감압 농축 한다. 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 녹여 1 mL로 질소 농축한 뒤, 2)의 과정을 거쳐 시험용액으로 한다.

2) 2,4,6-TCP로 변환
‘1) 추출’ 과정에서 얻은 용액에 pyridine hydrochloride 5 g을 넣고 200℃에서 2시간 동안 분해시킨다. 이후 0.2 M 염산 20 mL를 넣고 물 100 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣은 뒤, 디클로로메탄 50 mL로 2회 분배 추출하여 하층을 무수황산나트륨을 통과시켜 탈수 후 감압 농축한다. 유와 알은 에틸아세테이트 10 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 하고, 고기류 등 지방 많은 검체는 ‘3) 정제’ 과정을 따른다.

3) 정제
추출 및 2,4,6-TCP로 변환 후 감압 농축한 잔류물을 디클로로메탄 6 mL로 녹여, 디클로로메탄 10 mL로 활성화시킨 아미노프로필 카트리지(1 g)에 넣고 1% 포름산 함유 메탄올 10 mL로 용출하여 받은 후 감압 농축한다. 잔류물을 에틸아세테이트 10 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5 캐필러리 컬럼(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 7.0 mL/분

다) 주입부 온도 : 300℃

라) 오븐 온도 : 100℃에서 시료를 주입하고 2분간 유지한 후 15℃/분의 비율로 190℃까지 온도를 상승시켜 1분간 유지하고 20℃/분의 비율로 290℃까지 온도를 상승시켜 2분 이상 유지한다.

마) 주입량 : 1 μL, splitless

바) 검출기 온도 : 300℃

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프-전자포획검출기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프-전자포획검출기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

2,4,6-트리클로로페놀 (7.3분)

* 분석기기 : GC (Agilent 6890), ECD (Agilent),

컬럼 : DB-5 capillary column (30 m × 0.53 mm, 0.50 μm), 농도 : 20 μg/L

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.※ 프로클로라즈의 잔류량 = 환산계수*× 2,4,6-TCP의 잔류량* 환산계수 = 1.91 (프로클로라즈의 분자량 377 / 2,4,6-TCP의 분자량 197)

아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속: 헬륨(He), 1.0 mL/분

다)오븐 온도 : 80℃에서 2분간 유지한 후 15℃/분의 속도로 180℃까지 승온하고 10℃/분의 속도로 250℃까지 승온한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 인터페이스 온도: 280℃

바) 이온화: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입모드: splitless

아) 주입량: 1 μL

자) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
2,4,6-트리클로로페놀 (2,4,6-trichlorophenol)	197.5	196, 132

1)정량이온