7.3.2.12설폭사플로르(Sulfoxaflor)

가. 시험법 적용범위식육류, 우유류, 알류 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리시료를 0.5% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) d-SPE : 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하여 0.5% 아세트산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣고 5분간 흔들어 섞은 후, 추출물을 4℃, 3,000 G에서 5분간 원심분리하고 상층액을 취해 새로운 원심분리관에 옮긴다. 남아있는 시료에 0.5% 아세트산 함유 아세토니트릴 20 mL를 추가로 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞고, 추출물을 4℃, 3000 G에서 원심분리한 후 상층액을 취해 앞의 상층액과 합친다. 합친 용액을 -70℃ 초저온냉장고에 30분간 방치한 후 -4℃, 4,500 G에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제
상층액 전체를 새로운 원심분리관에 옮긴 후 아세토니트릴을 넣어 50 mL로 정용한 뒤, 용액 중 30 mL를 1차 2차 아민 600 mg이 미리 담겨져 있는 50 mL 원심분리관에 옮겨 2분간 강하게 흔들고 이를 4℃, 3,000 G에서 5분간 원심분리한다. 정제된 상층액 중 20 mL를 취하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 다음 0.01% 포름산 함유 아세토니트릴을 넣어 최종부피가 2 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.01% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.01% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	0	100
3.0	0	100
5.0	90	10
8.0	90	10
9.0	0	100
12.0	0	100

라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.5 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) Cone voltage : 15 V

마) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
설폭사플로르 (Sulfoxaflor)	277.3	277.0	278	104	10
				1741)	10

1)정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

설폭사플로르(5.8분)

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.