8.3.15밤버마이신(Bambermycin, Flavomycin, Flavophospholipol)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료중 밤버마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction)카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 표준품을 물에 녹여 표준원액으로 한다.

라) 표준용액: 표준원액을 잔류허용기준 또는 검출에 적합한 농도가 되도록 이동상으로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2): 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 물로 녹여 표시선까지 채운다.

바) C18카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약: 특급또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한시료2 g에 아세토니트릴 6 mL를 넣어 완전히 혼합한 후 1,000G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치한 후 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고50℃ 이하에서질소 농축한 후 잔류물을 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 물5 mL로 활성화시킨 C18카트리지에 추출액을 흡착시키고 물 5 mL 및 2% 아세톤 함유 헥산5 mL로 3회유출시켜 버린 후, 메탄올 6 mL로용출하여 받는다.용출액은40℃ 이하에서 질소농축하고잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 컬럼:C18(2.1 mm × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상

① 이동상 A:0.1% 포름산 함유 5% 아세토니트릴

② 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	50	50
20.0	90	10
20.1	50	50
25.0	50	50

(다) 유속: 0.2 mL/분

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization mode: ESI(negative)

(나) Spray voltage: 4.5 kV

(다) Capillary temperature: 280℃

(라) Sheath gas: N2(질소)(50 psi)

(마) Auxiliary gas: N2(질소)(10 psi)

(바) SIM ion:m/z1580

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진각 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을작성하여 시료 중 밤버마이신의 함량을구한다.