8.3.32피란텔(Pyrantel)

1) 시험법 적용범위
축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
시료중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 아세토니트릴 포화 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

나) 물:3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액:표준품을 메탄올에 녹여 조제한 용액을 표준원액으로 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액:표준원액을잔류허용기준 또는 검출에 적합한 농도가 되도록메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 0.1%포름산(formic acid) 수용액:1,000 mL 용량플라스크에포름산1 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 20 mM포름산암모늄(ammonium formate) 함유 0.1%포름산 수용액: 1,000 mL 용량플라스크에포름산1 mL와포름산암모늄 1.26 g을넣고 녹인 후 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.2%포름산함유 메탄올: 1,000 mL 용량플라스크에포름산2 mL를 넣고 메탄올로표시선까지 채운다.

아) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제
균질화한시료2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 아세토니트릴 10 mL를 넣고15분간흔들어 섞고 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토 니트릴 포화 헥산 10 mL를 넣은 후10분간흔들어 섞고 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 하층액을 취한 뒤, 40℃ 이하에서 질소농축 하고잔류물에 0.1% 포름산 수용액 2 mL과 메탄올 2 mL를 넣어 녹인 뒤 10분간 초음파 처리한 후 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 0.2 μm PVDF(polyvinylidenefluoride) 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 분석조건

(1)컬럼: C18(2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2)컬럼온도: 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A: 0.2%포름산 함유 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	10	90
2.1	10	90
4.0	95	5
8.0	95	5
10.0	10	90
11.0	10	90

(나) 이동상 B: 20 mM포름산암모늄 함유 0.1%포름산 수용액

(4)유속:0.25 mL/분

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization mode: ESI(positive)

(2) Capillary voltage: 0.5 kV

(3) Collision gas: Ar(아르곤)

(4) Capillary temperature: 350℃

(5)분석대상물질의 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	이온화 (Ionization mode)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
피란텔 (Pyrantel)	4.48	Positive	206.1	207.3	97.0	18
					135.9	26
					150.0	24

※ 밑줄 표시되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

7) 정성시험

가) 정성 및 확인

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.
확인시험의 경우, 음성시료 (blank sample)에 해당 물질을 넣은 것을 시료와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액 으로서 비교한다.

주1)생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율 (Base peak에 대한 %)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 피란텔(4.5분) 표준품의 크로마토그램(0.01 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성시료(blank sample) 2 g씩 준비한 후음성시료(blank sample)를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도,시료량과최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

　　피란텔(Pyrantel):0.0005 mg/kg