10.1.3.2.2 옥수수 및 옥수수 가공품의 DNA 추출

QIAGEN Plant Maxi kit를 이용할 경우 균질하게 분쇄된 검체 1 g을 폴리프로필렌 튜브(50 mL용)에 넣고, AP1 완충용액(미리 65℃로 가온한 것) 5 mL와 RNase A (100 ㎎/mL) 10μL를 가하여 교반기로 잘 혼합하여, 65℃에서 1시간 동안 반응시킨다. 이때 매 15분마다 10초간 교반기를 사용하여 검체와 반응액이 충분히 혼합되도록 한다. AP2 완충용액 1.8 mL를 가하여 혼합 후 얼음 속에 15분간 정치한 후, 스윙로터를 사용하여 3,000G로 15분간 실온에서 원심 분리한다(상층액이 깨끗하지 않은 경우 원심분리를 반복하여 실시한다). 상층에 생기는 막과 침전물을 건드리지 않게 조심하면서 맑은 상층액(4.2 mL)을 QIA Shredder Spin Column에 옮긴 후, 스윙로터를 이용하여 3,000G에서 5분간 실온에서 원심분리한다. 칼럼을 통과한 여액(4 mL)을 새로운 50 mL 튜브에 옮겨 10초간 잘 혼합한 후 이 액(3.4 mL)을 새로운 50 mL 튜브에 옮긴다. 에탄올을 첨가한 AP3 용액을 1.5배량(5.1 mL) 넣어 10초간 잘 혼합한 후, DNeasy Maxi Spin Column에 옮기고 스윙로터를 이용하여 3,000G에서 5분간 실온에서 원심분리하여 DNA를 칼럼에 부착시키고 칼럼을 통과한 여액은 버린다. 칼럼에 AW 용액 12 mL를 가하고 3,000G에서 15분간 실온에서 원심분리하여 세척한 후, 칼럼을 새로운 50 mL 튜브에 옮겨, 미리 65℃로 가온한 멸균증류수 1 mL를 가하고 실온에서 5분간 둔 후 스윙로터를 이용하여 3,000G에서 10분간 실온에서 원심 분리하여 DNA를 용출시킨다. 용출액을 2 mL 튜브에 옮겨 동량의 이소프로판올을 가하고 상하로 10회 정도 뒤집어 준 후 실온에서 5분간 정치한다. 고정식 로터를 사용하여 12,000G로 15분간 4℃에서 원심분리한 후 침전물에 닿지 않도록 주의하면서 마이크로피펫을 이용하여 상층액을 제거한다. 70% 에탄올 500μL를 가하여 튜브 벽에 붙은 침전물이 분리될 때까지 조심스럽게 씻어낸다. 12,000G로 3분간 4℃에서 원심분리한 후 잔류하는 에탄올을 마이크로피펫을 사용하여 제거한 후 침전물의 잔류 에탄올이 완전히 휘발될 정도로만 건조시킨다. 건조된 침전물에 50μL의 멸균증류수 또는 TE 완충용액(pH 8.0)을 가하고 4℃에서 12～24시간 정치하면서 완전히 녹여 이를 DNA 원액으로 한다.