10.1.3.2.3 감자 및 감자 가공품의 DNA 추출

QIAGEN의 DNeasy Plant Mini kit를 이용할 경우 균질하게 분쇄된 검체 200 ㎎을 원심분리용 튜브(15 mL용)에 넣어, 미리 65℃로 가온한 AP1 완충용액 1.5 mL와 RNase A (100 ㎎/mL) 10μL를 가하여 교반기로 잘 혼합하여, 65℃에서 15분간 반응시킨다. 5분마다 10초간 교반기를 사용하여 검체와 반응액이 충분히 혼합되도록 한다. AP2 완충용액 400μL를 가하여 얼음 속에 5분간 정치한 후, 10,000G로 5분간 실온에서 원심분리한다. 원심분리 후 맑은 상층액을 다른 원심분리용 튜브에 옮기고, 그중 500μL를 QIA Shredder Spin Column에 가하여 10,000G로 2분간 실온에서 원심분리하여 칼럼을 통과한 여액을 새로운 튜브에 옮긴다. 남은 상층액도 같은 과정으로 반복한다. 얻어진 여액을 2 mL 튜브 2개에 각각 옮긴 후 에탄올을 첨가한 AP3 용액 1.5배량을 가하여 10초간 잘 혼합한다. 이 액을 500μL씩 나누어 같은 DNeasy Mini Spin Column에 가하고 10,000G로 1분간 실온에서 원심분리하여 DNA를 칼럼에 부착시킨 후 칼럼을 통과한 하층액은 버린다. 칼럼에 AW 용액 500μL를 가하여 10,000G로 1분간 실온에서 원심분리하여 세척하고, 한번 더 AW 용액 500μL를 가하여 같은 조작을 반복한다. 이 칼럼을 건조시키기 위해 10,000G로 15분간 실온에서 원심분리한 후 새로운 1.5 mL 튜브에 옮긴다. 칼럼에 미리 65℃로 가온한 멸균수 50μL을 가하여 실온에서 5분간 둔 후 10,000G로 1분간 실온에서 원심분리하여 DNA를 용출시킨다. 한번 더 칼럼에 미리 65℃로 가온한 멸균수 50μL를 가하여 같은 조작을 반복하고, 이를 DNA 원액으로 한다.

주1) 참고

DNA 추출․정제법 중 실리카겔 막 형태를 이용한 방법으로 소개된 QIAGEN Plant Maxi kit와 QIAGEN DNeasy Plant Mini kit에서 사용된 AP1 및 AP2 완충용액과 RNase A는 키트에 포함되어 있는 것 외에 별도로 구입 가능하다.