7.3.1.5 아바멕틴 등 26종 다성분 시험법
가. 시험법 적용범위닭고기, 알 등축산물에적용한다.
나. 분석원리시료를 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출하고, 원심분리하여 상층액을 취해 PSA(Primary Secondary Amine), C18및 GCB( Graphitized Carbon Black )를 이용하여 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
다. 장치
1)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함)
5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
마. 시험용액의 조제
1) 추출
시료(닭의 경우 피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위 100 g, 알의 경우 달걀, 오리알은 10개, 메추리알 20개 또는 이와 동등한 양)를 균질화한 후5 g을 정확히 달아 50 mL 용량 원심분리관에 넣고 1% 아세트산이 함유된 아세토니트릴 15 mL를 넣어1분간강하게흔들어 섞어 추출한다. 원심분리관에 무수황산마그네슘 6 g과 무수아세트산나트륨 1.5 g을 차례로 넣고 10분간 강하게흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 G에서 10분간 원심분리한다.2) 정제
새로운15 mL 용량 원심분리관에 무수황산마그네슘 1,200 mg, C 18400 mg, PSA 400 mg과 GCB 45 mg 을 넣고 ‘1)추출’로부터 얻은 용액 중 상층액 6 mL를 넣고 1분간 강하게흔들어 섞은 후 4℃, 4000 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액 중 3 mL를 취하여 질소를 이용하여 농축, 건고한 후 잔류물에 메탄올을1 mL를 넣어녹인다. 추출액을 멤 브레인 필터(nylon 재질, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가)컬럼: C18계 역상 컬럼또는 이와 동등한 것
나)컬럼 온도: 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 메탄올
(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 아세트산암모늄 함유 물
(3) 농도구배조건
시간(분) |
A(%) |
B(%) |
0.0 |
5 |
95 |
3.0 |
90 |
10 |
7.0 |
90 |
10 |
7.1 |
5 |
95 |
12.0 |
5 |
95 |
라) 이동상유속: 0.2 mL/분
마) 주입량 : 2 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 방법 : ESI positive 및 negative ion mode
나) Capillary voltage : 5.5 kV
다) Collision gas : 질소(N2) 또는 아르곤(Ar)
라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
|
분석성분 (Compound) |
이온화 (Ionizationmode) |
머무름시간 (분) |
분자량 (MW) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precursorion,m/z) |
생성이온 (Product ion,m/z) |
충돌 에너지 (Collisionenergy, eV) |
1 |
2,4-디메틸아닐린*** (2,4-Dimethylaniline) |
+ |
3.53 |
121.2 |
121.0 |
122 |
1071) |
21 |
105 |
23 |
|||||||
77 |
37 |
|||||||
2 |
아바멕틴* (Abamectin) |
+ |
6.78 |
873.1 |
872.4 |
891 |
3051) |
31 |
95 |
95 |
|||||||
568 |
19 |
|||||||
3 |
아미트라즈*** (Amitraz) |
+ |
6.76 |
293.4 |
293.1 |
294 |
1631) |
23 |
107 |
57 |
|||||||
106 |
83 |
|||||||
4 |
카바릴 (Carbaryl) |
+ |
4.56 |
201.2 |
201.0 |
202 |
1451) |
15 |
127 |
41 |
|||||||
117 |
33 |
|||||||
5 |
클로티아니딘 (Clothianidin) |
+ |
3.73 |
249.7 |
249.0 |
250 |
1691) |
17 |
132 |
23 |
|||||||
113 |
35 |
|||||||
6 |
사이퍼메트린 (Cypermethrin) |
+ |
6.55 |
416.3 |
415.0 |
433 |
1911) |
21 |
127 |
43 |
|||||||
91 |
69 |
|||||||
7 |
다이아지논 (Diazinon) |
+ |
5.56 |
304.3 |
304.1 |
305 |
1691) |
29 |
153 |
27 |
|||||||
97 |
43 |
|||||||
8 |
디클로르보스*** (Dichlorvos) |
+ |
4.47 |
221.0 |
219.9 |
221 |
1091) |
23 |
79 |
37 |
|||||||
95 |
47 |
|||||||
9 |
에톡사졸 (Etoxazole) |
+ |
6.33 |
359.4 |
359.1 |
360 |
1411) |
43 |
113 |
85 |
|||||||
304 |
25 |
|||||||
10 |
페니트로티온 (Fenitrothion) |
+ |
3.95 |
277.2 |
277.0 |
295 |
1741) |
19 |
154 |
45 |
|||||||
278 |
9 |
|||||||
11 |
페노뷰카브 (Fenobucarb) |
+ |
4.95 |
207.3 |
207.1 |
208 |
951) |
19 |
77 |
53 |
|||||||
152 |
11 |
|||||||
12 |
펜설포티온 (Fensulfothion) |
+ |
4.71 |
308.4 |
308.0 |
309 |
2811) |
21 |
253 |
25 |
|||||||
173 |
33 |
|||||||
13 |
피프로닐 (Fipronil) |
+ |
5.25 |
437.1 |
435.9 |
437 |
3681) |
25 |
255 |
41 |
|||||||
290 |
37 |
|||||||
14 |
피프로닐설폰 (Fipronil sulfone) |
- |
5.34 |
453.2 |
451.9 |
451 |
4151) |
24 |
282 |
38 |
|||||||
244 |
64 |
|||||||
15 |
플루페녹수론 (Flufenoxuron) |
+ |
6.22 |
488.8 |
488.0 |
489 |
1581) |
27 |
141 |
71 |
|||||||
113 |
103 |
|||||||
16 |
아이소펜포스 (Isofenphos) |
+ |
5.60 |
345.4 |
345.1 |
346 |
2451) |
17 |
217 |
31 |
|||||||
121 |
51 |
|||||||
17 |
이버멕틴** (Ivermectin) |
+ |
7.86 |
875.1 |
874.5 |
892 |
5691) |
21 |
307 |
35 |
|||||||
551 |
29 |
|||||||
18 |
메타미도포스 (Methamidophos) |
+ |
1.62 |
141.1 |
141.0 |
142 |
941) |
21 |
125 |
19 |
|||||||
79 |
29 |
|||||||
19 |
메티다티온 (Methidathion) |
+ |
4.86 |
302.3 |
301.9 |
303 |
1451) |
17 |
85 |
27 |
|||||||
58 |
39 |
|||||||
20 |
모노크로토포스 (Monocrotophos) |
+ |
3.50 |
223.2 |
223.0 |
224 |
1271) |
21 |
58 |
33 |
|||||||
109 |
43 |
|||||||
21 |
포레이트 (Phorate) |
+ |
3.89 |
260.4 |
260.0 |
261 |
751) |
15 |
97 |
39 |
|||||||
125 |
25 |
|||||||
22 |
포레이트 옥손 (Phorate oxon) |
+ |
4.85 |
244.3 |
244.0 |
245 |
751) |
17 |
47 |
41 |
|||||||
41 |
37 |
|||||||
23 |
포레이트 옥손 설폰 (Phorate oxon sulfone) |
+ |
3.89 |
276.3 |
276.0 |
277 |
1271) |
21 |
111 |
39 |
|||||||
99 |
35 |
|||||||
24 |
포레이트 옥손 설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide) |
+ |
3.96 |
260.3 |
260.0 |
261 |
1111) |
29 |
97 |
31 |
|||||||
81 |
67 |
|||||||
25 |
포레이트 설폰 (Phorate sulfone) |
+ |
4.68 |
292.4 |
292.0 |
293 |
1711) |
17 |
97 |
39 |
|||||||
115 |
33 |
|||||||
26 |
포레이트 설폭사이드 (Phorate sulfoxide) |
+ |
4.65 |
276.4 |
276.0 |
277 |
1991) |
13 |
97 |
41 |
|||||||
143 |
29 |
|||||||
27 |
피리미포스메틸 (Pirimiphos methyl) |
+ |
5.68 |
305.3 |
305.0 |
306 |
1641) |
29 |
108 |
37 |
|||||||
67 |
59 |
|||||||
28 |
프로폭서 (Propoxur) |
+ |
4.46 |
209.3 |
209.1 |
210 |
651) |
43 |
111 |
21 |
|||||||
93 |
29 |
|||||||
29 |
피리다벤 (Pyridaben) |
+ |
6.77 |
364.9 |
364.1 |
365 |
1471) |
33 |
309 |
17 |
|||||||
117 |
89 |
|||||||
30 |
스피로메시펜 (Spiromesifen) |
+ |
6.25 |
370.5 |
370.2 |
371 |
2731) |
15 |
255 |
33 |
|||||||
187 |
37 |
|||||||
31 |
설폭사플로르 (Sulfoxaflor) |
+ |
3.94 |
277.3 |
277.0 |
278 |
1741) |
13 |
154 |
39 |
|||||||
105 |
15 |
|||||||
32 |
테트라코나졸 (Tetraconazole) |
+ |
5.17 |
372.2 |
371.0 |
372 |
1591) |
43 |
70 |
43 |
|||||||
33 |
트리클로르폰 (Trichlorfon) |
+ |
3.89 |
257.4 |
255.9 |
257 |
1091) |
21 |
79 |
43 |
|||||||
83 |
67 |
3) 검량선 작성
농도별 표준 용액을 일정량 취하여 무처리 시료 추출 용액과 각각 혼합 한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
4) 표준품의 크로마토그램
그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
* 컬럼 : Imtakt, Cadenza®CD C18(2.0 mm × 50 mm, 3 μm)
5) 정량한계
가)정량한계가 제시되지 않은 농약 검출시 정량분석은 다음을 따른다.
(1) ‘*’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 8.3.9 시험법으로 정량한다.
(2) ‘**’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 8.3.98 시험법으로 정량한다.
(3) ‘***’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 8.3.106 시험법으로 정량한다.
나) 정량이 가능한 농약
분석성분 (Compound) |
정량한계(mg/kg) |
|
가금류고기 |
알 |
|
2,4-디메틸아닐린*** (2,4-Dimethylaniline) |
- |
- |
아바멕틴 (Abamectin) |
0.01 |
0.01 |
아미트라즈*** (Amitraz) |
- |
- |
카바릴 (Carbaryl) |
0.005 |
0.005 |
클로티아니딘 (Clothianidin) |
0.01 |
0.01 |
사이퍼메트린 (Cypermethrin) |
0.005 |
0.005 |
다이아지논 (Diazinon) |
0.005 |
0.005 |
디클로르보스** (Dichlorvos) |
- |
- |
에톡사졸 (Etoxazole) |
0.005 |
0.005 |
페니트로티온 (Fenitrothion) |
0.005 |
0.005 |
페노뷰카브 (Fenobucarb) |
0.005 |
0.005 |
펜설포티온 (Fensulfothion) |
0.005 |
0.005 |
피프로닐 (Fipronil) |
0.005 |
0.01 |
피프로닐설폰 (Fipronil sulfone) |
0.005 |
0.005 |
플루페녹수론 (Flufenoxuron) |
0.005 |
0.005 |
아이소펜포스 (Isofenphos) |
0.005 |
0.005 |
이버멕틴* (Ivermectin) |
- |
- |
메타미도포스 (Methamidophos) |
0.01 |
0.01 |
메티다티온 (Methidathion) |
0.005 |
0.005 |
모노크로토포스 (Monocrotophos) |
0.005 |
0.005 |
포레이트 (Phorate) |
0.005 |
0.005 |
포레이트 옥손 (Phorate oxon) |
0.005 |
0.005 |
포레이트 옥손설폰 (Phorate oxon sulfone) |
0.005 |
0.005 |
포레이트 옥손 설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide) |
0.005 |
0.005 |
포레이트 설폰 (Phorate sulfone) |
0.005 |
0.005 |
포레이트 설폭사이드 (Phorate sulfoxide) |
0.005 |
0.005 |
피리미포스메틸 (Pirimiphos methyl) |
0.005 |
0.005 |
프로폭서 (Propoxur) |
0.005 |
0.005 |
피리다벤 (Pyridaben) |
0.005 |
0.005 |
스피로메시펜 (Spiromesifen) |
0.005 |
0.005 |
설폭사플로르 (Sulfoxaflor) |
0.01 |
0.01 |
테트라코나졸 (Tetraconazole) |
0.005 |
0.005 |
트리클로르폰 (Trichlorfon) |
0.01 |
0.01 |
사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 확인한다.