- ▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.3 축·수산물의 잔류물질 ▶ 7.3.1 다성분 시험법 (multiresidue methods) ▶ 7.3.1.8 루페뉴론(Lufenuron), 메타플루미존(Metaflumizone), 비페나제이트(Bifenazate), 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole), 아세타미프리드(Acetamiprid), 에토펜프록스(Etofenprox), 테부페노자이드(Tebufeno
7.3.1.8 루페뉴론(Lufenuron), 메타플루미존(Metaflumizone), 비페나제이트(Bifenazate), 사이안트라닐리프롤(Cyantraniliprole), 아세타미프리드(Acetamiprid), 에토펜프록스(Etofenprox), 테부페노자이드(Tebufenozide)
가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물에 적용한다.
나. 분석원리
시료를 아세트산 함유 아세토니트릴과 에틸아세테이트의 혼합액으로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
다. 장치
1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 농약 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 희석한 표준원액과 무처리 시료추출물*을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.
* 무처리 시료추출물 : 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것을 말한다.
5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급을 사용한다.
마. 시험용액의 조제
1) 추출
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(고기류의 경우 10 mL 물을 첨가하여 10분간 습윤화) 1% 아세트산 함유 에틸아세테이트 : 아세토니트릴(30 : 70) 혼합액 10 mL 를 가한 후 1분간 흔들어 섞는다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 무수아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 3분간 흔들어 섞은 후, 1시간동안 –20℃에 냉동보관 후 3,000 G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.
2) 정제
무수황산마그네슘 1,200 mg, C18 400 mg, PSA 400 mg이 담긴 15 mL 원심분리 튜브에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 6 mL를 넣고 1분간 충분히 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액 900 μL에 아세토니트릴 100 μL을 넣어 1000 μL로 맞춰 혼합한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.
바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건
가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 : 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄을 함유한 물
(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄을 함유한 메탄올
(3) 농도구배조건
| 시간(분) | A(%) | B(%) |
| 0 | 95 | 5 |
| 3 | 95 | 5 |
| 12 | 10 | 90 |
| 15 | 10 | 90 |
| 18 | 95 | 5 |
| 20 | 95 | 5 |
라) 이동상 유량 : 0.2 mL/분
마) 주입량 : 2 μL
바) 이온화 방법 : ESI positive ion mode
사) Capillary voltage : 5.5 kV
아) Collision gas : 질소(N2)
자) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
| 분석성분 (Compound) |
머무름 시간(분) |
분자량 (MW) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precursor ion, m/z) |
생성이온 (Product ion, m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
|
| 1 | 루페뉴론 (Lufenuron) |
15.0 | 511.2 | 509.97 | 511 | 158 1) | 27 |
| 141 | 27 | ||||||
| 2 | 메타플루미존 (Metaflumizone) |
E-14.3 | 506.4 | 506.1 | 507 | 78 1) | 47 |
| Z-14.7 | 287 | 47 | |||||
| 3 | 비페나제이트 (Bifenazate) |
13.4 | 300.4 | 300.10 | 301 | 198 1) | 15 |
| 170 | 29 | ||||||
| 비페나제이트-디아젠 (Bifenazate-diazene) |
14.7 | 298.3 | 298.10 | 299 | 213 1) | 17 | |
| 197 | 29 | ||||||
| 4 | 사이안트라닐리프롤 (Cyantraniliprole) |
11.9 | 473.7 | 474 | 473 | 283 1) | 23 |
| 112 | 75 | ||||||
| 5 | 아세타미프리드 (Acetamiprid) |
10.1 | 222.7 | 222.06 | 223 | 126 1) | 20 |
| 99 | 33 | ||||||
| IM-2-1 | 10 | 208.7 | 208.05 | 209 | 126 1) | 25 | |
| 127 | 31 | ||||||
| 6 | 에토펜프록스 (Etofenprox) |
17.8 | 376.5 | 376.20 | 394 | 177 1) | 20 |
| 107 | 20 | ||||||
| 7 | 테부페노자이드 (Tebufenozide) |
13.8 | 352.5 | 352.2 | 353 | 133 1) | 47 |
| 105 | 47 | ||||||
2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
3) 표준품의 크로마토그램
그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시
* 분석기기 : LC(AB SCIEX), MS/MS(AB SCIEX QTRAP 5500)
컬럼(Unison-UK C18, 2.0 mm × 100 mm, 3 μm)
4) 정량한계(mg/kg)
0.01 mg/kg
자. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다. 시험용액의 농도가 검량선 범위를 초과하는 경우 무처리 시료 추출물로 희석하여 검량선 범위 내에서 정량한다.
차. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기의 머무름 시간과 특성이온으로 농약을 확인한다.
