6.12.1.7 이성화당
 
  
가. 장치
 
  
바깥지름 22 mm, 길이 370 mm의 칼럼에 세라이트(No. 545) 2 g을 넣고, 그 위에 흡착제(활성탄소 Darco G 60∶Celite No. 545＝1∶1) 12 g을 약 150 mL의 물에 분산시켜 넣는다. 흡인장치를 이용하여 흡착제를 침강시키고 그 위에 세라이트 약 2 g을 넣은 후 물 250 mL를 흘려보내 씻고, 세라이트 상층에 물이 약간 남을 때까지 유출시킨다.
 
  
나. 시험용액 조제
 
  
검체 1 g을 물 10 mL에 녹인 후 흡인장치를 이용하여 칼럼에 넣고 7% 에탄올 300 mL로, 다음에 25% 에탄올 100 mL로 씻어 버린 후 50% 에탄올 100 mL로 유출시킨다. 유출액을 비커에 옮기고 증기욕 중에서 공기나 질소를 흘려보내거나, 이와 동등한 방법으로 농축한다.
 
  
잔류물을 1 mL의 물로 씻어 시험관(13×100 mm)에 옮기고, 60℃ 수욕중에서 공기나 질소를 흘려보내 농축한 후 0.1~0.2 mL 물로 잔류물을 녹여서 시험용액으로 한다.
 
  
다. 시험조작(박층크로마토그래피)
 
  
실리카겔G박층 하단에서 2 cm의 일직선상에 시험용액과 순수한 벌꿀 및 이성화당이 혼합된 벌꿀로 시험용액 조제와 동등한 방법으로 조제된 용액을 2~6μL동시에 찍고, 이를 전개용매에 담그어 전개시킨다. 전개가 끝나면 건조한 후, 발색액을 분무하고 용매를 날려 보낸 후 15분간 90~95℃건조기에 넣고 정색시킨다. 순수한 벌꿀은 Rf치 약 0.35이상에서 비교적 큰 반점이 1~2개 나타나며 이성화당이나 물엿이 혼합된 벌꿀은 원점 위에서부터 반점이 나타난다. 검체가 원점에서 Rf치 약 0.35사이에 반점이 나타나면 양성으로 한다.
 
  
<전개용매>
 
  
n-부탄올∶초산∶물(2∶1∶1)
 
  
<발색액>
 
  
아닐린(사용전에 아연말을 넣어 재증류한 것 1 mL와 디페닐아민․염산염 1 g을 50 mL의 아세톤에 용해하고 인산(85%) 5 mL를 가한다. 0℃이하에서 보존하거나 사용시 조제한다.)