- ▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.3 축·수산물의 잔류물질 ▶ 7.3.2 단성분 시험법 (Individual residue method) ▶ 7.3.2.17 에톡시퀸(Ethoxyquin)
7.3.2.17에톡시퀸(Ethoxyquin)
가. 시험법 적용범위수산물 등에 적용한다.
나. 분석원리시료 중의 에톡시퀸과 에톡시퀸다이머를 아세토니트릴로 추출하고 QuEChERS시약을 이용하여 지방을 제거한 다음, PSA, C18, MgSO4로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.
다. 장치
1) 액체
크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)라. 시약 및 시액
1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 각각의 표준품을 정밀히 달아 메탄올(에톡시퀸) 또는 아세토니트릴(에톡시퀸다이머)에 녹여 100mg/L가 되게 한다.
4)혼합표준용액 : 각각의 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.
5) 10 mM 포름산 암모늄 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 포름산 암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.
6) 아스코르브산 및 아스코르브산 나트륨 혼합용액(AA혼합용액) : 100 mL 용량플라스크에 아스코르브산 7.5 g과 아스코르브산 나트륨 7.5 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.
7) QuEChERS시약 : QuEChERS pouch(sodium citrate 1 g, NaCl 1 g, MgSO4 4g, Sodium sesquihydrate 0.5 g) 또는 이와 동등한 것
8) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것
마. 시험용액의 조제
1) 추출
균질화한 시료 2 g 을 정밀히 달아 50 mL 폴리프로필렌 재질의 시험관에 취하고 AA혼합용액 0.5 mL를 넣어 가볍게 흔들어 섞는다. 물 5 mL와 아세토니트릴 10 mL를 넣고 15분간 흔들어 섞은 다음 QuEChERS 시약 6.5 g을 넣어 1분간 흔들어 섞은 후 4,700G, 4℃에서 5분간 원심분리 한다. 상층액을 150 mg PSA, 150 mg C18과 900 mg MgSO4가 담겨진 50 mL 폴리프로필렌 재질의 튜브에 취한 후 1분간 흔들어 섞고 4,700G, 4℃에서 5분간 원심분리 한다. 정제된 상층액 1 mL를멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 150 mm, 2.7 µm) 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 : 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 10 mM 포름산 암모늄 용액
(2) 이동상 B : 아세토니트릴
(3)농도구배조건
| 시간(분) |
이동상 A(%) |
이동상 B(%) |
| 0 |
40 |
60 |
| 1 |
40 |
60 |
| 8 |
0 |
100 |
| 9 |
0 |
100 |
| 9.5 |
40 |
60 |
| 12 |
40 |
60 |
라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분
마) 주입량 : 5 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
나) Capillary temperature : 350℃
다) Collision gas : 아르곤(Ar)
라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
| 분석성분 (Compound) |
머무름 시간 (분) |
분자량 (MW) |
선구이온 (Precusor ion,m/z) |
생성이온 (Product ion,m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
| 에톡시퀸 (Ethoxyquin) |
3.62 |
217.3 |
218 |
1481) |
20 |
| 134 |
20 |
||||
| 176 |
18 |
||||
| 에톡시퀸 다이머 (Ethoxyquin dimer) |
8.92 |
432.6 |
433 |
2161) |
25 |
| 188 |
35 |
||||
| 375 |
29 |
1)정량이온
사. 정성 및 확인시험위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율이 허용범위(± 20∼30%) 이내에서 일치하여야 한다주1). 확인시험의 경우, 음성대조시료(Negative control sample)에 측정물질을 첨가한 것을 시료와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.
주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위
| 이온간 반응세기의 비율(%) |
허용범위 |
| > 50% |
± 20% |
| > 20%, ≤ 50% |
± 25% |
| > 10%, ≤ 20% |
± 30% |
1) 표준품 크로마토그램
그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
에톡시퀸 표준품(3.62분)
그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
에톡시퀸 다이머 표준품(8.92분)
아. 정량시험
1) 정량
조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당물질이 검출되지 않은 음성대조시료(Negative control sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 시료량과 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.
2) 정량한계
에톡시퀸(Ethoxyquin) : 0.01 mg/kg 에톡시퀸 다이머(Ethoxyquin dimer) : 0.01 mg/kg
