3.1.3 데히드로초산, 소브산, 안식향산 및 그 염류, 파라옥시안식향산에스테르류 동시분석법
 
  
가. 액체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량
 
  
1) 시험법 적용 범위 
 
 
  
식육가공품, 유가공품, 잼류, 장류, 조미식품, 빵 또는 떡류, 알가공품, 어육가공품, 식용유지류, 면류 및 음료류 등에 적용한다.
 
  
2) 분석원리 
 
 
  
식품 중의 보존료를 용매추출한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.
 
  
3) 시약 및 용액 
 
 
  
가) 아세토니트릴 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것
 
  
나) 에탄올․무수 : 시료전처리용
 
  
다) 인산 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것
 
  
라) 표준용액 : 소브산, 안식향산, 데히드로초산, 파라옥시안식향산에스테르류 각 0.1 g을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mL씩으로 한 액을 각 표준원액으로 한다. 각 표준원액을 취하여1～100 mg/L(소브산, 1.5～150 mg/L, 데히드로초산 0.6～60 mg/L)가 되도록희석한 액을 표준용액으로 한다.
 
  
마) 카레스(Carrez)침전제 : 제1액 15% 페로시안화칼륨용액, 제2액 30% 황산아연용액
 
  
4) 분석조건 
 
 
  
가) 컬 럼 : Capcell pak MF-C8,(4.5 ㎛, 4.6×150 mm) 또는 이와 동등한 것
 
  
나) 검출기 : 자외부흡광검출기(UV Detector), 235 nm
 
  
다) 유 속 : 1.0 mL/min 또는 적절하게 조절한다.
 
  
라) 이동상: 이동상 A(0.1% TBA-OH (0.1% 인산) 용액) : 40% TBA-OH (Tetrabutylammonium hydroxide) 2.5 g과 85% 인산 1.2 g을 증류수로 희석하여 1 L로 한 후 용매여과장치로 여과한다.
 
  
이동상 B : 아세토니트릴
 
  
 
   
 
    
 
     
 
시간(분)
 
 
     
 
이동상 A
 
 
     
 
이동상 B
 
 
    
 
    
 
     
 
0.0
 
 
     
 
75
 
 
     
 
25
 
 
    
 
    
 
     
 
2.5
 
 
     
 
75
 
 
     
 
25
 
 
    
 
    
 
     
 
7.0
 
 
     
 
65
 
 
     
 
35
 
 
    
 
    
 
     
 
12.0
 
 
     
 
60
 
 
     
 
40
 
 
    
 
    
 
     
 
15.0
 
 
     
 
70
 
 
     
 
30
 
 
    
 
   
 
  
 
  
5) 정량한계 
 
 
  
데히드로초산(0.6 mg/kg), 소브산(1.5 mg/kg), 안식향산(1.0 mg/kg), 파라옥시안식향산메틸(1.0 mg/kg), 파라옥시안식향산에틸(1.0 mg/kg)
 
  
6) 시험용액의 조제 
 
 
  
균질화된 검체 5 g을 취하여 50 mL 메스플라스크에 넣은 후 에탄올 30 mL를 가한다. 이 액에 카레스(Carrez) 침전제 제 1액 2mL를 가해 흔들어 섞은 다음 다시 카레스(Carrez) 침전제 제2액 2 mL를 가해 2분간 흔들어 섞는다. 발생한 거품은 초음파 처리하여 제거한 후, 에탄올을 가해 50 mL로 하고 4000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 취한 다음 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 시험용액의 보존료 농도가 검량선의 농도범위를 벗어날 경우 농도범위내로 희석하여 사용한다.
 
  
7) 정량시험 
 
 
  
시험용액 및 표준용액을 각각 주입하여 얻은 피크의 넓이 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 각 보존료별 농도(㎎/L)를 구하고, 다음 식에 의거 검사시료 중 보존료 양을 구한다.
 
  
 
   
 
    
 
     
 
보존료의 양(g/kg)=
 
 
     
 
S x a
 
 
     
 
x
 
 
     
 
1
 
 
    
 
    
 
     
 
검사시료채취량(g)
 
 
     
 
1,000
 
 
    
 
   
 
  
 
  
S : 시험 용액중의 각 보존료의 농도(㎎/L)
 
  
a : 시험용액의 희석배수