7.1.3.60 메트알데하이드(Metaldehyde)
 
  
 가. 시험법의 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
 
  
 나. 분석원리시료를 디클로로메탄으로 1차 추출한 후 유도체화시켜 디클로로메탄으로 2차 추출한다. 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.
 
  
 다. 장치
 
  
 1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)
 
  
 라. 시약 및 시액
 
  
 1) 용매:잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
 
  
 2) 실리카(silica) : 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.
 
  
 3) 표준원액:표준품을 디클로로메탄에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.
 
  
 4) 표준용액:표준원액을 클로로포름에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.
 
  
 5) 2,4-디니트로페닐하이드라진(2,4-Dinitrophenylhydrazine, 2,4-DNPH):6 N 염산용액 200 mL에 2,4-DNPH 0.5 g을 녹여 조제한다.
 
  
 6) 기타시약:잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 마. 시험용액의 조제
 
  
 1) 추출(1차)
 시료 25 g을 추출 용기에 정밀히 달아 넣고 디클로로메탄 100 mL를 넣고 2분간 강하게 흔들어 추출 한다. 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물을 디클로로메탄 40 mL로 씻어 내려 위의 여과액과 합친 후 1 L 분액깔때기로 옮기고 2% Na 2S2O5수용액 100 mL를 넣어 1분간 강하게흔들어 섞는다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨 후 수용액 층은 버리고 다시 디클로로메탄층에 2% Na 2S2O5수용액 100 mL를 넣어 앞서의 과정을 되풀이 한다. 디클로로메탄층에 추가로 물 100 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞고 층이 완전히 분리된 후 수용액 층은 버린다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한 후 40℃에서 감압 농축한다.
 
  
 2) 유도체화
 위의 잔류물에 디클로로메탄 10 mL를 넣어 잔류물을 녹이고 2,4-디니트로페닐하이드라진 염산용액 10 mL를 넣어 40℃에서 20분간 교반하여 유도체 반응을 거친다.
 
  
 3) 추출(2차)
 20분이 경과한 반응액을 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴 후 디클로로메탄 20 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞는다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 10 g에 통과시켜 탈수한다. 다시 수용액 층에 디클로로메탄 20 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 다음 앞서의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃에서 감압 농축하여 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.
 
  
 4) 정제
 안지름 15 mm, 길이 40 cm의 컬럼관에 실리카 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL를 유출하여 버린다. 상기 용해액 10 mL를 넣은 후 약 3 mL/분의 유속으로 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 에틸아세테이트 : 헥산(10 : 90) 혼합액 100 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트 : 헥산(20 : 80) 혼합액 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 건고물은 아세토니트릴 : 물(50 : 50) 혼합액 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다. ※ 주：실험용기 세척시 주로 사용되는 아세톤은 일부의 아세트알데하이드를 포함하고 있어 분석에 방해가 됨으로 상기시험법 이용시 사용되는 용기는 디클로로메탄으로 세척 후 사용하여야 한다.
 
  
 바. 시험조작
 
  
 1) 액체크로마토그래프의 분석조건
 
  
 가) 컬럼:C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
 
  
 나) 검출파장:360 nm
 
  
 다) 컬럼 온도:40℃
 
  
 라) 이동상:아세토니트릴과 물(50 : 50)의 혼합액
 
  
 마) 이동상유속 :1 mL/분
 
  
 바) 주입량:20 μL
 
  
 2) 검량선 작성
 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
 
  
 3) 표준품의 크로마토그램
 
  
 
 
  
 그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.
 
  
 아세트알데하이드-2,4-DNPH(9.3분)
 
  
 4) 정량한계
 0.01 mg/kg
 
  
 5) 액체크로마토그래프․질량분석기 분석조건
 
  
 가) 컬럼:C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
 
  
 나) 이동상:아세토니트릴과 물(50 : 50)의 혼합액
 
  
 다) 컬럼 온도:40℃
 
  
 라) 이동상유속 :1 mL/분
 
  
 마) 주입량:5 μL
 
  
 바) 이온화:APCI negative-ion mode
 
  
 사) 분자량 범위:100～300m/z
 
  
 아) Capillary temperature:275℃
 
  
 자) Cone voltage:-55 V
 
  
 차) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 분석성분
 
 (Compound)
 
 
     
 
 머무름 시간
 
 (분)
 
 
     
 
 분자량
 
 (MW)
 
 
     
 
 이온
 
 (m/z)
 
 
    
 
    
 
     
 
 아세트알데하이드-2,4-DNPH
 
 (Acetaldehyde-2,4-DNPH)
 
 
     
 
 9.3
 
 
     
 
 224.2
 
 
     
 
 223
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 사. 정성시험위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.
 
  
 아. 정량시험정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.