7.1.3.75 테퓨릴트리온(Tefuryltrione)
 
  
 가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
 
  
 나. 분석원리시료를포름산을 포함한 아세토니트릴로 추출한 후 에틸아세테이트 : 디클로로메탄 혼합용매로 액-액 분배하고 플로리실 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
 
  
 다. 장치
 
  
 1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
 
  
 라. 시약 및 시액
 
  
 1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
 
  
 3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
 
  
 4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.
 
  
 5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge) : 플로리실 고정상(1 g)이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것
 
  
 6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 마. 시험용액의 조제
 
  
 1) 추출
 시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 (건조 시료의 경우 물 10 mL를 가한 후 30분방치) 아세토니트릴 30 mL, 물 10 mL 및 포름산 0.4 mL를 넣고 30분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친다. 여과액을 500 mL 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 20 mL와 물 40 mL를 차례로 가한 후 에틸아세테이트 : 디클로로메탄(70 : 30) 혼합액 20 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞고 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨다. 상층의 에틸아세테이트 : 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 에틸아세테이트 : 디클로로메탄(70 : 30) 혼합액 20 mL를 추가로 넣고 상층의 에틸아세테이트 : 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 3회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 아세톤 : 디클로로메탄(50 : 50) 혼합액 10 mL로 녹인다.
 
  
 2) 정제
 플로리실 카트리지에 아세톤 : 디클로로메탄(50 : 50) 혼합액 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 중 1 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시키고 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤 : 디클로로메탄(50 : 50) 혼합액 5 mL를 유출시켜 버린 후 4% 포름산이 포함된 아세톤 : 디클로로메탄(60 : 40) 혼합액 8 mL를 용출하여받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한 다.
 
  
 바. 시험조작
 
  
 1) 액체크로마토그래프 분석조건
 
  
 가) 컬럼 : C18(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것
 
  
 나) 컬럼 온도 : 40℃
 
  
 다) 이동상
 
  
 (1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴
 
  
 (2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물
 
  
 (3) 농도구배조건
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 시간(분)
 
 
     
 
 A(%)
 
 
     
 
 B(%)
 
 
    
 
    
 
     
 
 0.1
 
 
     
 
 50
 
 
     
 
 50
 
 
    
 
    
 
     
 
 3.0
 
 
     
 
 80
 
 
     
 
 20
 
 
    
 
    
 
     
 
 4.0
 
 
     
 
 80
 
 
     
 
 20
 
 
    
 
    
 
     
 
 5.5
 
 
     
 
 50
 
 
     
 
 50
 
 
    
 
    
 
     
 
 15.0
 
 
     
 
 50
 
 
     
 
 50
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 라) 이동상 유속 : 0.25 mL/분
 
  
 마) 주입량 : 10 μL
 
  
 2) 질량분석기 분석조건
 
  
 가) 이온화 : ESI positive-ion mode
 
  
 나) Capillary temperature : 300℃
 
  
 다) Spray voltage : 3.5 kV
 
  
 라) Collision gas : 아르곤(Ar)
 
  
 마)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 분석성분
 
 (Compound)
 
 
     
 
 선구이온
 
 (Precursor ion,m/z)
 
 
     
 
 생성이온(Product ion,m/z)
 
 
     
 
 충돌에너지
 
 (Collision energy, eV)
 
 
    
 
    
 
     
 
 테퓨릴트리온
 
 (Tefuryltrione)
 
 
     
 
 443
 
 
     
 
 261
 
 
     
 
 30
 
 
    
 
    
 
     
 
 3051)
 
 
     
 
 20
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 1)정량이온
 
  
 3) 검량선 작성
 표준용액을 아세토니트릴에 일정농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.
 
  
 4) 표준품의 크로마토그램
 
  
 
 
  
 그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.
 
  
 테퓨릴트리온(4.3분)
 
  
 5) 정량한계
 0.03 mg/kg
 
  
 사. 정량시험위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.