7.1.3.77 아이소페타미드(Isofetamid)
 
  
가.시험법적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
 
  
나.분석원리시료를 아세토니트릴로 추출하여 C18카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
 
  
다.장치
 
  
1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS) 
 
 
  
라.시약 및 시액
 
  
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급 
 
 
  
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것 
 
 
  
3) 표준원액 : 아이소페타미드 및 GPTC 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다. 
 
 
  
4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다. 
 
  
5) C18카트리지 : C18(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것 
 
  
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급 
 
 
  
마.시험용액의 조제
 
  
1) 추출 
 시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 40 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과보조제(Celite 545) 10 g을 이용해 흡인 여과한 뒤 아세토니트릴 40 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한 후 아세토니트릴을 넣어 100 mL로 정용한다. 
 
  
2) 정제 
 C18카트리지에 아세토니트릴 5 mL를 2〜3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 중 2 mL를 카트리지에 넣고 1〜2 방울/초의 속도로 용출하여 감압농축플라스크에 받은 후 추가로 아세토니트릴 10 mL를 용출하여 합친 뒤 이를 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 농축 건고물에 아세토니트릴 : 물(50 : 50) 혼합액을 넣어 최종부피 2 mL가 되게 한 뒤 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. 
 
  
바.시험조작
 
  
1) 액체크로마토그래프 분석조건 
 
 
  
가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것
 
  
나) 컬럼 온도 : 40℃
 
  
다) 이동상
 
  
(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 
 
 
  
(2) 이동상 B : 물 
 
 
  
(3) 농도구배조건 
 
 
  
 
   
 
    
 
     
 
시간(분)
 
 
     
 
A(%)
 
 
     
 
B(%)
 
 
    
 
    
 
     
 
0.0
 
 
     
 
5
 
 
     
 
95
 
 
    
 
    
 
     
 
3.0
 
 
     
 
5
 
 
     
 
95
 
 
    
 
    
 
     
 
5.0
 
 
     
 
100
 
 
     
 
0
 
 
    
 
    
 
     
 
8.0
 
 
     
 
100
 
 
     
 
0
 
 
    
 
    
 
     
 
8.1
 
 
     
 
5
 
 
     
 
95
 
 
    
 
    
 
     
 
10.0
 
 
     
 
5
 
 
     
 
95
 
 
    
 
   
 
  
 
  
라) 이동상 유속 : 0.25 mL/분
 
  
마) 주입량 : 5 μL
 
  
2) 질량분석기 분석조건 
 
 
  
가) 이온화 : ESI positive-ion mode
 
  
나) Capillary voltage : 3.5 kV
 
  
다) Collision gas : 아르곤(Ar)
 
  
라) Cone voltage
 
  
(1) 아이소페타미드 : 30 V 
 
 
  
(2) GPTC : 41 V 
 
 
  
마) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
 
  
 
   
 
    
 
     
 
분석성분
 
(Compound)
 
 
     
 
선구이온
 
(Precursor ion,m/z)
 
 
     
 
생성이온(Product ion,m/z)
 
 
     
 
충돌에너지
 
(Collision energy, eV)
 
 
    
 
    
 
     
 
아이소페타미드
 
(Isofetamid)
 
 
     
 
360.2
 
 
     
 
1251)
 
 
     
 
31
 
 
    
 
    
 
     
 
210
 
 
     
 
9
 
 
    
 
    
 
     
 
지피티시
 
(GPTC)
 
 
     
 
480.2
 
 
     
 
1251)
 
 
     
 
30
 
 
    
 
    
 
     
 
210
 
 
     
 
12
 
 
    
 
   
 
  
 
  
1)정량이온
 
  
3) 검량선 작성 
 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다. 
 
  
4) 표준품의 크로마토그램 
 
 
  
 
  
그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
 
  
A : 아이소페타미드(6.2분), B : 지피티시(GPTC)(5.2분)
 
  
5) 정량한계 
 0.01 mg/kg
 
  
사.정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
 
  
아.확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 아이소페타미드 및 GPTC를 확인한다.