7.1.3.91 톨피라레이트(Tolpyralate)
 
  
 가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.
 
  
 나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
 
  
 다. 장치
 
  
 1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
 
  
 라. 시약 및 시액
 
  
 1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
 
  
 3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
 
  
 4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).
 
  
 5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine), C 18(octadecyl bonded silica), 흑연화탄소(GCB, Graphitized Carbon Black)
 
  
 6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 마. 시험용액의 조제
 
  
 1) 추출
 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고( 곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액 1 mL를 취한다.
 
  
 2) 정제
 무수황산마그네슘 150 mg과 1차 2차 아민 50 mg, C 1850 mg, 흑연화탄소 7.5 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 와류교반기 등을 이용하여 충분히 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.
 
  
 바. 시험조작
 
  
 1) 액체크로마토그래프 분석조건
 
  
 가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것
 
  
 나) 컬럼 온도 :30℃
 
  
 다) 이동상
 
  
 (1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴
 
  
 (2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물
 
  
 (3) 농도구배조건
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 시간(분)
 
 
     
 
 A(%)
 
 
     
 
 B(%)
 
 
    
 
    
 
     
 
 0.0
 
 
     
 
 20
 
 
     
 
 80
 
 
    
 
    
 
     
 
 2.0
 
 
     
 
 20
 
 
     
 
 80
 
 
    
 
    
 
     
 
 2.5
 
 
     
 
 80
 
 
     
 
 20
 
 
    
 
    
 
     
 
 5.0
 
 
     
 
 80
 
 
     
 
 20
 
 
    
 
    
 
     
 
 5.5
 
 
     
 
 20
 
 
     
 
 80
 
 
    
 
    
 
     
 
 7.0
 
 
     
 
 20
 
 
     
 
 80
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분
 
  
 마) 주입량 : 5 μL
 
  
 2) 질량분석기 분석조건
 
  
 가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
 
  
 나) Capillary voltage : 1.0 kV
 
  
 다) Collision gas: 아르곤(Ar)
 
  
 라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 분석성분
 
 (Compound)
 
 
     
 
 분자량
 
 (MW)
 
 
     
 
 관측질량
 
 (Exact mass)
 
 
     
 
 선구이온
 
 (Precursor ion,m/z)
 
 
     
 
 생성이온(Product ion,m/z)
 
 
     
 
 충돌에너지
 
 (Collision energy, eV)
 
 
    
 
    
 
     
 
 톨피라레이트
 
 (Tolpyralate)
 
 
     
 
 484.5
 
 
     
 
 484.1
 
 
     
 
 485
 
 
     
 
 1391)
 
 
     
 
 31
 
 
    
 
    
 
     
 
 325
 
 
     
 
 20
 
 
    
 
    
 
     
 
 383
 
 
     
 
 14
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 1)정량이온
 
  
 3) 검량선 작성
 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
 
  
 4) 표준품의 크로마토그램
 
  
 
 그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.톨피라레이트(3.5분)
 * 분석기기 : LC(WatersⓇAcquity UPLC), MS/MS(WatersⓇXevo TQ-S),
 컬럼(Unison UK-C18, 2.0 mm I.D. × 50 mm L., 3.0 μm)
 
  
 5) 정량한계
 0.01 mg/kg
 
  
 사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
 
  
 아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 톨피라레이트를 확인한다.