- ▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.1 식품일반 ▶ 7.1.3 단성분 시험법(Individual residue methods) ▶ 7.1.3.98 아사이노나피르(Acynonapyr)
7.1.3.98 아사이노나피르(Acynonapyr)
가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive -Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
다. 장치
1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 아사이노나피르 및 대사산물(AP) 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).
5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
7) 특이사항 : 대사산물(AP)은 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정은 폴리프로필렌으로 된 용기를 사용한다.
마. 시험용액의 조제
1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고( 곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 후 1 N 수산화나트륨 용액으로 추출용액의 pH를 10으로 조절한 뒤 10분간 흔들어 섞는다. 추출물에 염화나트륨 4 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액 1 mL를 취한다.2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 1차 2차 아민 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴 상층액을 30초간 와류교반기 등을 이용하여 충분히 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 :40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 메탄올
(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물
(3) 농도구배조건
| 시간(분) |
A(%) |
B(%) |
| 0.0 |
50 |
50 |
| 2.0 |
50 |
50 |
| 4.0 |
80 |
20 |
| 8.0 |
100 |
0 |
| 9.0 |
100 |
0 |
| 9.1 |
50 |
50 |
| 12.0 |
50 |
50 |
라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분
마) 주입량 : 2 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
나) Capillary voltage : 1.0 kV
다) Collision gas : 아르곤(Ar)
라)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
| 분석성분 (Compound) |
분자량 (MW) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precursor ion,m/z) |
생성이온(Product ion,m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
| 아사이노나피르 (Acynonapyr) |
504.5 |
504.1 |
505 |
3421) |
10 |
| 96 |
26 |
||||
| 122 |
32 |
||||
| 대사산물 (AP) |
343.4 |
343.1 |
344 |
821) |
32 |
| 96 |
32 |
||||
| 124 |
24 |
1)정량이온
3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
4) 표준품의 크로마토그램
그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
A : 아사이노나피르(7.5분), B : AP(3.9분)
* 분석기기 : LC(WatersⓇAcquity UPLC), MS/MS(WatersⓇXevo TQ-S),
컬럼(Capcell Pak C18MG Ⅱ(3.0 mm I.D. × 150 mm L., 3.0 μm)
5) 정량한계
0.01 mg/kg
사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
※아사이노나피르의 잔류량 = 아사이노나피르의 잔류량 ＋ (환산계수*× 대사산물(AP)의 잔류량)
* 환산계수 = 1.47(아사이노나피르 분자량 505/AP 분자량 343)
아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 아사이노나피르 및 대사산물(AP)을 확인한다.
