7.1.3.101 펜피콕사미드(Fenpicoxamid)
 
  
가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
 
  
나. 분석원리시료 중 펜피콕사미드를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
 
  
다. 장치
 
  
1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS) 
 
 
  
라. 시약 및 시액
 
  
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것 
 
 
  
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것 
 
 
  
3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다. 
 
 
  
4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함). 
 
 
  
5) d-SPE : 1차 2차 아민(PSA, Primary secondary amine), C 
 18(Octadecyl bonded silica) 
 
  
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급 
 
 
  
마. 시험용액의 조제
 
  
1) 추출 
 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치). 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 섞고 4,000 G에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액 전량을 취한 후 아세토니트릴 20 mL를 재차 넣어 위 과정을 반복한다. 앞의 상층액과 합하여 부피를 50 mL로 맞춘 후 상층액 8 mL를 취한다. 
 
  
2) 정제 
 1차 2차 아민 400 mg 및 C 18400 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1)추출’로부터 얻은 상층액 8 mL를 넣고 30초간 흔들어 섞고 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 4 mL 취하여 질소 농축한 후 아세토니트릴 2 mL로 녹이고, 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다. 
 
  
바. 시험조작
 
  
1) 액체크로마토그래프 분석조건 
 
 
  
가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것
 
  
나) 컬럼 온도 : 40℃
 
  
다) 이동상
 
  
(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 
 
 
  
(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물 
 
 
  
(3) 농도구배조건 
 
 
  
 
   
 
    
 
     
 
시간(분)
 
 
     
 
A(%)
 
 
     
 
B(%)
 
 
    
 
    
 
     
 
0.0
 
 
     
 
20
 
 
     
 
80
 
 
    
 
    
 
     
 
3.0
 
 
     
 
20
 
 
     
 
80
 
 
    
 
    
 
     
 
3.5
 
 
     
 
90
 
 
     
 
10
 
 
    
 
    
 
     
 
5.0
 
 
     
 
100
 
 
     
 
0
 
 
    
 
    
 
     
 
7.0
 
 
     
 
100
 
 
     
 
0
 
 
    
 
    
 
     
 
8.0
 
 
     
 
20
 
 
     
 
80
 
 
    
 
    
 
     
 
10.0
 
 
     
 
20
 
 
     
 
80
 
 
    
 
   
 
  
 
  
라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분
 
  
마) 주입량 : 2 μL
 
  
2) 질량분석기 분석조건 
 
 
  
가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
 
  
나) Capillary voltage : 5.5 kV
 
  
다) Collision gas : 아르곤(Ar)
 
  
라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
 
  
 
   
 
    
 
     
 
분석성분
 
(Compound)
 
 
     
 
분자량
 
(MW)
 
 
     
 
관측질량
 
(Exact mass)
 
 
     
 
선구이온
 
(Precursor ion,m/z)
 
 
     
 
생성이온(Product ion,m/z)
 
 
     
 
충돌에너지
 
(Collision energy, eV)
 
 
    
 
    
 
     
 
펜피콕사미드
 
(Fenpicoxamid)
 
 
     
 
614.6
 
 
     
 
614.2
 
 
     
 
615
 
 
     
 
2391)
 
 
     
 
37
 
 
    
 
    
 
     
 
515
 
 
     
 
20
 
 
    
 
    
 
     
 
585
 
 
     
 
16
 
 
    
 
   
 
  
 
  
1)정량이온
 
  
3) 검량선 작성 
 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다. 
 
  
4) 표준품의 크로마토그램 
 
 
  
 
  
그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
 
  
펜피콕사미드(4.8분)
 
  
* 분석기기 : LC (PerkinElmerⓇQSight™LX50), MS/MS (PerkinElmerⓇQSight™210), 
 
 
  
칼럼(Capcell core ADME, 2.1 mm I.D. × 100 mm L., 2.7 μm)
 
  
5) 정량한계 
 0.01 mg/kg
 
  
사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
 
  
아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 펜피콕사미드를 확인한다.