2.2.2.9 비타민B6(피리독신)
 
  
 가. 액체크로마토그래프에 의한 정량
 
  
 1) 장치
 
  
 액체크로마토그래프 : 형광검출기를 사용한다.
 
  
 2) 시약 및 시액
 
  
 가) 50 mM NaH2PO4：NaH2PO46.0 g을 증류수에 녹이고 염산으로 pH 2.5로 조절한 후 전량을 1 L로 한다.
 
  
 나) 표준용액의 조제
 
  
 비타민B6(피리독신염산염)을 증류수에 녹여 표준원액(100 μg/mL)을 조제하고, 표준원액을 증류수로 적당히 희석하여 표준용액을 만든다.
 
  
 3) 시험용액의 조제
 
  
 검체 0.5 ∼ 1.5 g을 취하여 잘게 부순 후, 증류수 25 mL를 가하여 30분 동안 초음파로 추출하고, 3,000 × g 원심분리하여 상등액을 여과한다. 잔류물에 증류수 25 mL를 다시 가하여 30분 동안 초음파로 추출하고, 원심분리하여 상등액을 여과하여 앞의 여액과 합하여 50 mL로 맞춘다. 이액을 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.
 
  
 4) 시험방법
 
  
 가) 액체크로마토그래프의 조건
 
  
 (1) 칼럼：역상칼럼(C18 또는 이와 동등한 것)
 
  
 (2) 이동상：50 mM NaH2PO4(pH 2.5)
 
  
 (3) 유속：1.0 mL/분
 
  
 (4) 검출기：형광검출기(여기파장：290 nm, 측정파장：396 nm)
 
  
 5) 정량시험
 
  
 시험용액 및 표준용액을 각각 10 μL씩 주입하여 앞의 조건에서 시험한다. 표준용액의 피크의 넓이 또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액의 비타민B6(피리독신)의농도(μg/mL)를 구하고, 다음의 식에 의하여 검체중 비타민B6의 함량(mg/100 g)을 구한다.
 
  
 가) 계산방법
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 비타민B6(피리독신, mg/100 g)
 
 
     
 
 =
 
 
     
 
 S
 
 
     
 
 ×
 
 
     
 
 a×b
 
 
     
 
 ×
 
 
     
 
 100
 
 
    
 
    
 
     
 
 검체량(g)
 
 
     
 
 1,000
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 S：시험용액중의 비타민B6(피리독신)의 농도(μg/mL)
 
  
 a：시험용액의 전량(mL)
 
  
 b：시험용액의 희석배수