3.3.4 부틸히드록시아니졸(BHA), 디부틸히드록시톨루엔(BHT), 터셔리부틸히드로퀴논(TBHQ) 및 몰식자산프로필(PG)
 
  
가. 액체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량
 
  
1) 시험법 적용범위 
 
 
  
식용유지, 버터, 어패건제품, 어패염장품, 어패냉동품등 등 식품에 적용한다.
 
  
2) 분석원리 
 
 
  
식품 중의 BHA, BHT, TBHQ 및 PG를 헥산으로 용해․추출하고, 용매추출을 통하여 정제한 다음, 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.
 
  
3) 장치 
 
 
  
가) 액체크로마토그래프 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector)를 사용한다.
 
  
4) 시약 및 시액 
 
 
  
가) 표준용액
 
  
BHA, TBHQ 각 50 ㎎과 PG 25 ㎎, BHT 100 ㎎을 이소프로판올 및 아세토니트릴혼액 (1 : 1)에 녹여 50 mL로 한다. 사용시 이액 10 mL를 취하여 위의 혼액으로 100 mL로 한다.
 
  
5) 시험용액의 조제 
 
 
  
가) 유지(액상식물유)
 
  
균질화한 검체 5 g을 비커에 달아, 5 mL 헥산이 들어 있는 125 mL분액깔때기에 옮기고, 헥산 15 mL로 여러번 나누어서 비커를 씻어 분액깔때기에 합친다.★여기에 헥산포화아세토니트릴 50 mL 씩으로 3회 추출하고(만약 유탁형태가 일어나면 뜨거운 물에 분액깔때기를 5～10초 동안 담구어서 분리한다), 추출액을 250 mL 분액깔때기에 합한다. 이 액을 농축플라스크에 서서히 옮겨 40℃이하의 수욕에서 감압농축기를 사용하여 감압건고한 후 헥산포화아세토니트릴로 씻어 전량을 5 mL로 한후, 이소프로판올 5 mL로 플라스크를 씻어 전량을 10 mL로 하여 시험용액으로 한다.
 
  
나) 버터, 마가린 등
 
  
검체를 60℃에서 가온하여 녹인 후, 그 2.5 g을 비커에 달아 5 mL 헥산이 들어 있는 125 mL 분액깔때기를 옮기고, 헥산 17.5 mL로 여러번 나누어서 비커를 씻어 분액깔때기에 합친다. 가) 유지(액상식물유)의 ★ 이하에 따라 조작한다.
 
  
다) 어패건제품, 어패염장품, 어패냉동품 등
 
  
잘게 썰은 검체 5～20 g을 달아 보조 뚜껑이 달린 블랜더(Blender with cap)에 옮기고 무수황산나트륨 약 15 g, 헥산 100 mL를 가하여 약 2분간 균일하게 섞은 다음 여과한다. 잔사(residue)에 헥산 100 mL를 가하여 추출을 되풀이하고, 여액을 합친다. 여액을 농축하여 약 20 mL로 한다. 가) 유지(액상식물유)의 ★ 이하에 따라 조작한다.
 
  
6) 시험방법 
 
 
  
가) 액체크로마토그래프의 측정조건
 
  
(1) 검출기 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector), 280nm 
 
 
  
(2) 칼럼：Capcell Pak C 
 18(4.6 mm × 250 mm × 5 μm) 또는 이와 동등한 것 
 
  
(3) 이동상 
 
 
  
(가) 이동상 A : 90% 아세토니트릴(1% 초산)
 
  
(나) 이동상 B : 1% 초산
 
  
 
   
 
    
 
     
 
시간(분)
 
 
     
 
이동상 A(%)
 
 
     
 
이동상 B(%)
 
 
    
 
    
 
     
 
0
 
 
     
 
30
 
 
     
 
70
 
 
    
 
    
 
     
 
5
 
 
     
 
70
 
 
     
 
30
 
 
    
 
    
 
     
 
10
 
 
     
 
95
 
 
     
 
5
 
 
    
 
    
 
     
 
15
 
 
     
 
95
 
 
     
 
5
 
 
    
 
    
 
     
 
20
 
 
     
 
30
 
 
     
 
70
 
 
    
 
   
 
  
 
  
(4) 컬럼온도 : 40℃ 
 
 
  
(5) 유속：1.0 mL/분 
 
 
  
(6) 주입량 : 10 μL 
 
 
  
7) 정성시험 
 
 
  
시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.
 
  
8) 정량시험 
 
 
  
시험용액 및 표준용액을 10 μL를 앞의 조건에 따라, 액체크로마토그래프칼럼에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 다음 식에 따라 검체 중의 BHA, BHT, TBHQ 및 PG의 양을 산출한다.
 
  
 
   
 
    
 
     
 
산화방지제(g/kg)＝각 표준용액의 농도(mg/L)
 
 
     
 
×
 
 
     
 
PA
 
 
     
 
×
 
 
     
 
10
 
 
     
 
×
 
 
     
 
1
 
 
    
 
    
 
     
 
PS
 
 
     
 
SA[g]
 
 
     
 
1,000
 
 
    
 
   
 
  
 
  
PS：표준용액의 높이 또는 면적
 
  
PA：시험용액의 높이 또는 면적
 
  
SA：검체의 채취량(g)