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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 4. 미생물시험법 ▶ 4.4 배지 및 시액 ▶ 4.4.1 배지

4.4.1 배지

미생물 시험을 위한 배지조제 시 이미 상품화된 배지의 사용이 가능하며, 사용할 경우 각 제조사별 조제법을 따를 수 있다.

1) 표준한천배지(Plate Count Agar)

Tryptone 5.0 g

Yeast Extract 2.5 g

Dextrose 1.0 g

Agar 15.0 g

위의 성분에 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 121℃로 15분간 멸균한다.

2) 유당배지(Lactose Broth)

Peptone 5.0 g

Beef Extract 3.0 g

Lactose 5.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 발효관을 넣은 시험관에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

3) BGLB배지(Brilliant Green Lactose Bile Broth)

Peptone 10.0 g

Lactose 10.0 g

Oxgall 20.0 g

Brilliant green 0.0133 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.1로 조정한 후 발효관을 넣은 시험관에 10 mL씩 분주하여121℃에서 15분간 멸균한다. 필요에 따라 MUG 50 mg을 첨가하여 사용한다(BGLB-MUG).

4) 두배농도 BGLB배지(Brilliant Green Lactose Bile Broth)

Peptone 20.0 g

Lactose 20.0 g

Oxgall 40.0 g

Brilliant green 0.0266 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.1로 조정한 후 발효관을 넣은 시험관에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

5) Endo 한천배지(Endo Agar)

Peptone 10.0 g

Lactose 10.0 g

Dipotassium Phosphate 3.5 g

Sodium Sulfite 2.5 g

Basic Fuchsin 0.5 g

Agar 15.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.4±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

6) EMB 한천배지(Eosine Methylene Blue Agar)

Peptone 10.0 g

Lactose 5.0 g

Sucrose 5.0 g

Dipotassium Phosphate 2.0 g

Eosin Y 0.4 g

Methylene Blue 0.065 g

Agar 13.5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

7) 보통배지(Nutrient Broth)

Peptone 5.0 g

Beef Extract 3.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0～7.4로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

8) 보통한천배지(Nutrient Agar)

Peptone 5.0 g

Beef Extract 3.0 g

Agar 15.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

9) 데스옥시콜레이트유당한천배지(Desoxycholate Lactose Agar)

Peptone 10.0 g

Lactose 10.0 g

Sodium Chloride 5.0 g

Sodium Citrate 2.0 g

Sodium Desoxycholate 0.5 g

Neutral Red 0.03 g

Agar 15.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3～7.5로 조정한 후 1분간 가열한다. 단, 고압증기멸균을 해서는 안 된다.

10) EC 배지(EC Broth)

Peptone 20.0 g

Lactose 5.0 g

Bile Salt Mixture 1.5 g

Dipotassium Phosphate 4.0 g

Monopotassium Phosphate 1.5 g

Sodium Chloride 5.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 발효관을 넣은 시험관에 10 mL 씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

11) BCP첨가 평판측정용 한천배지(Plate Count Agar with Bromocresol Purple)

Peptone 5.0 g

Yeast Extract 2.5 g

Dextrose 1.0 g

Tween 80 1.0 g

L-Cysteine 0.1 g

Bromocresol Purple 0.05 g

Agar 15.0 g

위의 성분(다만, 종균에 따라 적정 peptone을 사용하여야 함)을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8±0.2으로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

12) 포테이토 덱스트로즈 한천배지(Potato Dextrose Agar)

Potato Infusion 200.0 g

Dextrose 20.0 g

Agar 15.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 5.6±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 멸균된 10% 주석산을 무균적으로 가하여 pH를 3.5±0.1로 맞춘다.

13) 티오글리콜린산염배지(Fluid Thioglycollate Medium)

Yeast Extract 5.0 g

Casitone 15.0 g

Dextrose 5.0 g

Sodium Chloride 2.5 g

L-Cystine 0.75 g

Thioglycolic Acid 0.5 g

Agar 0.75 g

Resazurin 0.001 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH를 7.1±0.2로 조정하고 121℃에서 15분간 멸균한 후 찬물에 급냉하여 레자즈린(resazurin, 붉은색) 층이 나타나게 한다.

14) 난황첨가 만니톨 식염한천배지(Mannitol Salt Agar with Egg Yolk)

Beef Extract 2.5 g

Peptone 10 g

Mannitol 10 g

Sodium Chloride 75 g

Agar 15 g

Phenol Red 0.025 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 가열 용해한 후 pH 7.2～7.6으로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8)을 10%의 비율로 무균적으로 가해 잘 혼합한 후 사용한다.

15) BL 한천배지(BL Agar)

Beef Extract

Liver Extract

Yeast Extract

Proteose Peptone

Tryptone

Soypeptone

Soluble Starch

Glucose

Dipotassium Phosphate

Monopotassium Phosphate

Magnesium Sulfate

Sodium Chloride

Manganese Sulfate

L-Cysteine․HCl․H2O

Ferrous Sulfate

Polysorbate 80(Tween 80)

Agar

3 g

5 g

10 g

5 g

3 g

0.5 g

10 g

1 g

0.2 g

0.01 g

0.0067 g

0.5 g

0.01 g

1 g

15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여, 50℃로 냉각시킨 후 소, 말, 양의 탈 섬유소 혈액을 5% 되도록 첨가한다.

16) Alkaline 펩톤수(Alkaline Peptone Water)

Peptone 10 g

Sodium Chloride 20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 8.6(당을 포함한 제품의 경우에는 pH 9.2)으로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

17) TCBS 한천배지(Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar)

Yeast Extract 5 g

Peptone 10 g

Sodium Citrate 10 g

Sodium Thiosulfate 10 g

Oxgall 5 g

Sodium Cholate 3 g

Sucrose 20 g

Sodium Chloride 10 g

Ferrous Citrate 1 g

Bromothymol Blue 0.04 g

Thymol Blue 0.04 g

Agar 15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 8.6으로 조정한 후 가열하여 사용한다. 단, 고압증기멸균을 해서는 안 된다.

18) LIM 반유동배지(Lysine Indole Motility Medium)

Peptone 10 g

Yeast Extract 3 g

Dextrose 3 g

Bromocresol Purple 0.02 g

L-Lysine Hydrochloride 10 g

L-Tryptophan 0.5 g

Agar 3 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.7로 조정한 후 시험관에 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용한다.

19) VP 반유동배지(Voges-Proskauer Broth)

Yeast Extract 1 g

Casein Peptone 7 g

Soy Peptone 5 g

Dextrose 10 g

Sodium Chloride 5 g

Agar 3 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 7.0～7.2로 조정한 후 시험관에 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

20) Purple Broth Base

Proteose Peptone 10 g

Beef Extract 1 g

Sodium Chloride 5 g

Bromocresol Purple 0.015 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

21) Moeller Basal 배지(Moeller Basal Broth)

Peptone 5 g

Beef Extract 5 g

Dextrose 0.5 g

Bromocresol Purple 0.01 g

Cresol Red 0.005 g

Pyridoxal Hydrochloride 0.005 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.0으로 조정한 후 시험관에 분주하여 121℃ 에서 15분간 멸균한다. 균을 접종 후 멸균 유동파라핀을 중층한다.

22) ONPG 배지(O-nitrophenyl-β-D-galacto-pyranoside Broth)

Peptone 7.5 g

Sodium Chloride 3.75 g

ONPG 1.5 g

Disodium Phosphate 0.355 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.5으로 조정한 후 시험관에 2.5 mL 씩 분주하여 사용한다.

23) TSB 배지(Tryptic Soy Broth)

Tryptone 17 g

Soytone 3 g

Dextrose 2.5 g

Sodium Chloride 5 g

Dipotassium Phosphate 2.5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

24) 3% Ogawa 배지

Monopotassium Phosphate 3.0 g

Sodium Glutamate 1.0 g

Glycerin 6.0 mL

2% Malachite Green 6.0 mL

위의 성분을 증류수 100 mL에 녹이고 121℃에서 15분간 멸균한다. 50℃로 냉각시킨 후 달걀액(Egg-Homogenate) 200 mL을 넣고 충분히 혼합하여 5 mL씩 멸균시험관에 분주한 다음 85~90℃에서 60분간 가열한다.

25) TOS-MUP 배지

Trypticase peptone 10 g

Yeast Extract 1 g

KH2PO4 3 g

K2HPO4 4.8 g

(NH4)2SO4 3 g

Magnesium Sulfate 7H2O 0.2 g

(R)-Cysteine-HCl·H2O 0.5 g

Sodium propionate 15 g

TOS(Galactooligosaccharide) 10 g

Agar 15 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 6.3±0.2로 조정한 후 115℃에서 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 MUP(mupirocin) supplement( 1mg/mL)를 주사필터 (0.2㎛)한 후 50 mL를 위의 배지에 첨가한다.

26) Liver 한천배지(Liver agar)

Beef Liver Infusion 20 g

Proteose Peptone 10 g

Sodium Chloride 5 g

Agar 20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 일반세균의 증식을 억제하기 위하여 배지에 Bactracin(25 units/mL), Vancomycin(20 ㎍/mL), Polymyxin B(5 units/mL), Nalidixic acid (5 ㎍/mL)과 Cycloheximide(100 ㎍/mL)을 첨가한다.

27) 클로스트리디움 퍼프린젠스 한천배지(Clostridium Perfringens Agar)

Heart Infusion 5 g

Casein Peptone 10 g

Proteose Peptone 10 g

Sodium Chloride 5 g

Lactose 10 g

Phenol Red 0.05 g

Agar 20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.5±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균 후 배지를 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8)을 10%가 되도록 첨가한다.

28) Selenite F 배지(Selenite F Broth)

Polypeptone 5.0 g

Lactose 4.0 g

Disodium Phosphate 10.0 g

Sodium Selenite 4.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정하고 가열 용해한다.

29) SS 한천배지(Salmonella Shigella Agar)

Beef Extract 5.0 g

Proteose Peptone 5.0 g

Lactose 10.0 g

Bile Salt No.3 8.5 g

Sodium Citrate 8.5 g

Sodium Thiosulfate 8.5 g

Ferric Citrate 1.0 g

Agar 13.5 g

Brilliant Green 0.0033 g

Neutral Red 0.025 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정하고 가열 용해한다.

30) MacConkey 한천배지(MacConkey Agar)

Peptone 17.0 g

Polypeptone 3.0 g

Lactose 10.0 g

Bile Salts No.3 1.5 g

Sodium Chloride 5.0 g

Neutral Red 0.03 g

Crystal Violet 0.001 g

Agar 13.5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.1±0.2로 조정하고 가열 용해한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

31) Desoxycholate Citrate 한천배지(Desoxycholate Citrate Agar)

Beef Extract 5.0 g

Peptone 5.0 g

Lactose 10.0 g

Sodium Citrate 8.5 g

Sodium Thiosulfate 5.4 g

Ferric Ammonium Citrate 1.0 g

Sodium Desoxycholate 5.0 g

Neutral Red 0.02 g

Agar 12.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.5±0.2로 조정하고 가열 용해한다.

32) TSI 사면배지(Triple Sugar Iron Agar)

Beef Extract 3.0 g

Yeast Extract 3.0 g

Peptone 20.0 g

Lactose 10.0 g

Sucrose 10.0 g

Dextrose 1.0 g

Ferrous Sulfate 0.2 g

Sodium Chloride 5.0 g

Sodium Thiosulfate 0.3 g

Phenol Red 0.24 g

Agar 13.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.4±0.2로 조정하고 가열용해 한 후 시험관에 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한 후 사면으로 굳혀 사용한다.

33) Cooked Meat 배지(Cooked Meat Medium)

Beef Heart 454 g

Proteose Peptone 20 g

Dextrose 2 g

Sodium Chloride 5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

34) GAM 배지(Gifu Anaerobic Medium)

Peptone 10 g

Soytone 3 g

Proteose Peptone 10 g

Bovine Serum Albumin 13.5 g

Yeast Extract 5 g

Beef Extract 2.2 g

Monopotassium Phosphate 2.5 g

Liver Extract 1.2 g

Sodium Chloride 3 g

L-Cystein 0.3 g

Sodium Thioglychollate 0.3 g

Agar 1.5 g

Sugar 10 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 가열용해한 후 시험관에 분주하여 115℃에서 15분간 멸균 후 급냉시켜 사용한다. 당 분해능 확인시험을 위해 Sugar는 시험항목에 해당하는 것을 선택하여 사용한다.

35) Listeria 증균배지(Listeria Enrichment Broth)

Tryptone 17 g

Soytone 3 g

Glucose 2.5 g

Sodium Chloride 5 g

Dipotassium Phosphate 2.5 g

Yeast Extract 6 g

Cycloheximide 0.05 g

Acriflavin HCl 0.015 g

Nalidixic Acid 0.04 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

36) UVM Modified Listeria 증균배지(UVM Modified Listeria Enrichment Broth)

Tryptose 10 g

Beef Extract 5 g

Yeast Extract 5 g

Sodium Chloride 20 g

Disodium Phosphate 9.6 g

Monopotassium Phosphate 1.35 g

Esculin 1 g

Nalidixic Acid 0.02 g

Acriflavin HCl 0.012 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

37) Fraser Listeria 배지(Fraser Listeria Broth)

Tryptose 10 g

Beef Extract 5 g

Yeast Extract 5 g

Sodium Chloride 20 g

Disodium Phosphate 9.6 g

Monopotassium Phosphate 1.35 g

Esculin 1 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균하여 50℃로 식힌 후 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement ; Nalidixic Acid 0.02 g, Acriflavin HCl 0.021 g, Lithium Chloride 3 g

38) Oxford 한천배지(Oxford Agar)

Columbia blood agar base 39 g

Esculin 1 g

Ferric ammonium citrate 0.5 g

Lithium chloride 15 g

Agar 2 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고 50℃정도로 식힌 후 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement ; Cycloheximide 0.4 g, Colistin Sulfate 0.02 g, Acriflavin 0.005 g, Cefotetan 0.002 g, Fosfomycin 0.01 g

39) LPM 한천배지(Lithium Chloride Phenylethanol Moxalactam Agar)

Tryptose10 g

Beef Extract 3 g

Sodium Chloride 5 g

Lithium Chloride 5 g

Glycine Anhydride 10 g

Phenylethanol 2.5 g

Agar 15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고 이를 50℃정도로 식힌 후 Moxalactam 0.02 g을 여과멸균하여 가한다.

40) Tryptic Soy 한천배지(Tryptic Soy Agar)

Tryptose 17 g

Soytone 3 g

Glucose 2.5 g

Sodium Chloride 5 g

Dipotassium Phosphate 2.5 g

Agar 15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

41) TSC 한천배지(Tryptose-Sulfite-Cycloserine Agar)

Tryptose 15 g

Yeast Extract 5 g

Soytone 5 g

Ferric Ammonium Citrate 1 g

Sodium Metabisulfite 1 g

Agar 20 g

위의 성분에 증류수 900 mL를 가하여 녹인 후 pH 7.6±0.2로 조정한다. 이를 500 mL Flask에 250 mL씩 분주한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃정도로 식힌 후 D-cycloserine solution 20 mL와 난황액(시액 8)을 10%가 되도록 첨가한다.

D-cycloserine solution은 D-cycloserine 1 g을 200 mL의 증류수로 용해한 후 여과멸균하여 4℃로 보관하여 사용한다.

42) mEC 배지(mEC Broth)

Tryptone 20 g

Bile Salt No.3 1.5 g

Lactose 5.0 g

Dipotassium Phosphate 4.0 g

Monopotassium Phosphate 1.5 g

Sodium Chloride 5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고, Novobiocin Sodium 0.02 g을 여과멸균하여 가한다.

43) MacConkey Sorbitol 한천배지(MacConkey Sorbitol Agar)

Peptone 15.5 g

Proteose Peptone 3 g

D-Sorbitol 10 g

Bile Salts 1.5 g

Sodium Chloride 5 g

Agar 15 g

Neutral Red 0.03 g

Crystal Violet 0.001 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 7.1로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

44) PSBB 배지(Peptone Sorbitol Bile Broth)

Disodium Phosphate 8.23 g

Monosodium Phosphate 1.2 g

Bile Salts No.3 1.5 g

Sodium Chloride 5 g

D-Sorbitol 10 g

Peptone 5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 7.6으로 조정하고 121℃에서 15분간 멸균하여 사용한다.

45) CIN 한천배지(Cefsulodin Irgasan Novobiocin Agar)

Peptone 20 g

Yeast Extract 2 g

Mannitol 20 g

Sodium Pyruvate 2 g

Sodium Chloride 1 g

Magnesium Sulfate Heptahydrate 0.01 g

Agar 12 g

위의 성분을 750 mL의 증류수에 녹여 충분히 끓인 후 80℃로 식히고 95% 에탄올에 녹인 0.4% Irgasan 1mL 넣어 완전히 섞는다. 다음으로 200 mL의 desoxycholate 용액(증류수 200 mL에 sodium desoxycholate 0.5 g을 녹인 것)에 neutral red 10 mL(3 ㎎/mL), crystal violet 10 mL(0.1 ㎎/mL), cefsulodin 10mL(1.5 ㎎/mL), novobiocin 10 mL(0.25 ㎎/mL)를 가하여 준다. 천천히 흘리면서 10% strontium chloride 10mL를 넣는다. 1N NaOH로 pH 7.4로 조정한 후 분주하여 사용한다. 이 때 멸균 후 첨가하는 모든 시약은 멸균하여 사용한다.

46) MYP 한천배지(Mannitol Egg Yolk Polymyxin agar)

Beef Extract 1 g

Peptone 10 g

Mannitol 10 g

Sodium Chloride 10 g

Phenol Red 0.025 g

Agar 15 g

위의 성분을 증류수 900 mL에 녹이고 pH 7.2로 조정한 후 500 mL 플라스크에 225 mL씩 분주하고 121℃에서 15분간 멸균하여 50℃로 식힌 다음 Polymyxin B 용액(10,000 unit/mL) 2.5 mL와 난황액(시액 8) 12.5 mL를 각각 넣어 혼합한다.

47) HUNT(CEB) 배지(Hunt broth, Campylobacter Enrichment Broth)

Beef Extract 10 g

Peptone 10 g

Sodium Chloride 5 g

Yeast Extract 6 g

Ferrous Sulfate 0.25 g

Sodium Metabisulfite 0.25 g

Sodium Pyruvate 0.25 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹인 후 pH 7.5로 조정하고 121℃에서 15분간 멸균하여 식힌 다음 용혈시킨 말 혈액(Lysed Horse Blood) 50 mL, Supplement A 또는 Supplement B를 여과 멸균하여 가한다.

Supplement A : Sodium Cefoperazone 0.032 g, Trimethoprim Lactate 0.015 g, Vancomycin 0.01 g, Amphotericin B 0.002 g

Supplement B : Sodium Cefoperazone 0.032 g, Trimethoprim Lactate 0.015 g, Vancomycin 0.01 g, Rifampicin 0.005 g

48) Modified Campy Blood Free 한천배지(Modified Campy Blood Free Agar)

Meat Extract 10.0 g

Yeast Extract 2.0 g

Peptone 10.0 g

Sodium Chloride 5.0 g

Bacteriological Charcoal 4.0 g

Casein Hydrolysate 3.0 g

Sodium Deoxycholate 1.0 g

Ferrous Sulphate 0.25 g

Sodium Pyruvate 0.25 g

Agar 12.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.4로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고 50℃정도로 식힌 후 다음의 Supplement를 차례로 여과 멸균하여 가한다.

Supplement : Sodium Cefoperazone 0.032 g, Rifampicin 0.005 g, Amphotericin B 0.002 g

49) Abeyta-Hunt Blood 한천배지(Abeyta-Hunt Blood Agar)

Heart infusion broth 25 g

Agar 15 g

Yeast Extract 2 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹여 pH 7.4로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식힌 다음 용혈시킨 말 혈액(Lysed Horse Blood) 50 mL을 가하고 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement : Sodium Cefoperazone 0.032 g, Rifampicin 0.005 g, Amphotericin B 0.002 g

50) TPGY 배지(Trpticase Peptone Glucose Yeast Extract Broth)

Trypticase 50 g

Peptone 5 g

Yeast Extract 20 g

Dextrose 4 g

Sodium Thioglycollate 1 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 7.0으로 조정하고, 15 mL씩 시험관에 분주하여 121℃에서 10분간 멸균한다.

51) Liver-Veal 난황한천배지(Liver-Veal Egg Yolk Agar)

Liver Infusion 50.0 g

Veal Infusion 500.0 g

Proteose Peptone 20.0 g

Neopeptone 1.3 g

Tryptone 1.3 g

Dextrose 5 g

Soluble Starch 10 g

Isoelectric Casein 2 g

Sodium Chloride 5 g

Sodium Nitrate 2 g

Gelatin 20 g

Agar 15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균한 후, 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8)을 10%가 되도록 무균적으로 가한다.

52) 혐기성 난황 한천배지(Anaerobic Egg Yolk Agar)

Yeast Extract 5 g

Tryptone 5 g

Proteose Peptone 20 g

Sodium Chloride 5 g

Agar 20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0으로 조정하고, 121℃에서 15분간 멸균한 후 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8) 40 mL를 무균적으로 가한다.

53) 세균수 건조필름배지 Ⅰ

Pancreatic Digest of Casein 3.4 g

Yeast Extract 2.4 g

Sodium Pyruvate 6.8 g

Dextrose 0.6 g

Dipotassium Phosphate 1.3 g

Monopotassium Phosphate 0.4 g

Guar Gum 91.4 g

2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride 0.0205 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

54) 대장균군 건조필름배지 Ⅰ

Yeast Extract 9.6 g

Pancreatic Digest of Gelatin 20.9 g

Bile Salt No. 3 1.6 g

Peptic Digest of Animal Tissue 1.6 g

Lactose 21.4 g

Sodium Chloride 5.3 g

Crystal Violet 0.002 g

Neutral Red 0.1 g

Guar gum 65.7 g

2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride 0.11 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

55) 대장균 건조필름배지 Ⅰ

Yeast Extract 9.6 g

Pancreatic Digest of Gelatin 20.9 g

Bile Salt No. 3 1.6 g

Peptic Digest of Animal Tissue 1.6 g

Lactose 21.4 g

Sodium Chloride 5.3 g

Crystal Violet 0.002 g

Neutral Red 0.1 g

Guar gum 65.4 g

5-Bromo-4-Chloro-3-Indoxyl-beta-D-Glucuronic Acid,

Cyclohexyl Ammonium Salt 0.2 g

2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride 0.11 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

56) 펩톤수(Peptone water)

Peptone 10 g

Sodium Chlroride 5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2±0.2 되도록 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

57) RV 배지(Rappaport-Vassiliadis broth)

(1) Broth Base

Tryptone 5 g

NaCl 8 g

KH2PO4 1.6 g

Distilled water 1 L

(2) Magnesium chloride solution

MgCl2･6H2O 400 g

Distilled Water 1 L

(3) Malachite Green Oxalate Solution

Malachite Green Oxalate 0.4 g

Distilled Water 100 mL

완전한 배지를 준비하기 위해서 1,000 mL의 Broth base와 100 mL의 Magnesium chloride 용액과 10 mL의 Malachite green oxalate용액을 혼합한다(완전한 배지의 총량은 1110 mL이다). Broth base는 완전한 배지에 첨가되는 성분과 동일한 날에 준비하고 Magnesium Chloride 용액은 1년동안 실온에서 갈색병에 보관이 가능하다.

58) XLD 한천배지(Xylose Lysine Desoxycholate agar)

Yeast extract 3 g

L-Lysine 5 g

Xylose 3.75 g

Lactose 7.5 g

Sucrose 7.5 g

Sodium Desoxycholate 2.5 g

Ferric Ammonium Citrate 0.8 g

Sodium Thiosulfate 6.8 g

Sodium Chloride 5 g

Agar 15 g

Phenol Red 0.08 g

위의 성분에 증류수 1,000 mL를 가하여 가열용해한 후 사용한다. 단, 고압증기멸균해서는 안된다.

59) EE 배지(Enterobacteriaceae Enrichment broth)

Peptone 10.0 g

Glucose 5.0 g

Disodium Phosphate 8.0 g

Monopotassium Phosphate 2.0 g

Oxgall 20.0 g

Brilliant Green 0.015 g

위의 성분을 1,000 mL의 증류수에 가하여 100℃에서 30분간 가열용해 하여 사용한다.

60) CESA 한천배지(Chromogenic Enterobacter sakazakii Agar)

Tryptone 15.0 g

Soya Peptone 5.0 g

Sodium Chloride 5.0 g

Ferric Amonium Citrate 1.0 g

Sodium Desoxycholate 1.0 g

Sodium Thiosulphate 1.0 g

Chromogen 0.1 g

Agar 15.0 g

위의 성분을 1,000 mL의 증류수에 가열 용해한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

61) VRBG 한천배지(Violet Red Bile Gglucose Agar)

Yeast Extract 3.0 g

Peptone 7.0 g

Sodium Chloride 5.0 g

Bile Salts No. 3 1.5 g

Lactose 10.0 g

Neutral Red 0.03 g

Crystal Violet 0.002 g

Agar 15.0 g

Glucose 10.0 g

위의 성분을 1,000 mL의 증류수에 가열 용해하여 사용한다. 단 고압증기멸균을 해서는 안된다.

62) E. sakazakii 한천배지(E. sakazakii Agar)

Tryptone 20.0 g

Bile Salts No. 3 1.5 g

Sodium Thiosulphate 1.0 g

Ferric Ammonium Citrate 1.0 g

MUG α-D-glucopyranoside 0.05 g

Agar 15.0 g

위의 성분을 1,000 mL의 증류수에 가열 용해한 후, pH 7.0 ± 0.2 로 조정하고 121℃에서 15분간 멸균한다.

63) Baird-Parker 한천배지(Baird-Parker Agar)

Tryptone 10 g

Beef Extract 5 g

Yeast Extract 1 g

Sodium Pyruvate 10 g

Glycine 12 g

Lithium Chloride 6H2O 5 g

Agar 20 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃정도로 식힌 다음 0.1% Potassiun Tellurite가 첨가된 난황액(시액 8) 50 mL을 첨가한다.

64) Bismuth Sulfite 한천배지(Bismuth Sulfite Agar)

Peptone 10 g

Beef extract 5 g

Dextrose 5 g

Disodium Phosphate 4 g

Ferrous sulfate 12 g

Bismuth Sulfite Indicator 8 g

Brilliant Green 0.025 g

Agar 20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.2로 조정한 후 가열하여 사용한다.

65) PALCAM 한천배지(Polymyxin Acriflavin LiCl Ceftazidime Esculin Mannitol Agar)

Peptone 23 g

Mannitol 10 g

Sodium Chloride 5 g

Starch 1 g

Ferric Aammouium Citrate 0.5 g

Esculin 0.8 g

Dextrose 0.5 g

Lithium Chloride 15.0 g

Phenol Red 0.08 g

Agar 13 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.2±0.2 로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃로 식히고 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement : Polymyxin B sulfate 0.01 g, Acriflavin 0.005 g, Ceftazidime 0.02 g

66) TC-SMAC 한천배지(Tellurite Cefixime-Sorbitol MacConkey Agar)

Potassium tellurite 2.5 mg

(1% Potassium tellurite 용액 250 μL)

Cefixime 0.05 mg

(95% 에탄올 용액 1 L에 cefixime 50 mg을 녹인 용액 1 mL)

MacConkey Sorbitol 한천배지(배지43) 1,000 mL을 121℃에서 15분간 멸균하고, 50℃정도로 식힌 다음 여과멸균한 위의 성분들을 차례로 가한다. 1% Potassium tellurite 용액은 4℃에서 1개월간, Cefixime 용액은 -20℃에서 1년간 보관이 가능하다.

67) Baird-Parker RPF한천배지(Baird-Parker RPF Agar)

Tryptone 1 g

Beef Extract 0.5 g

Yeast Extrac 0.1 g

Sodium Pyruvate 1 g

Glycine 1.2 g

Lithium Chloride 6H2O 0.5 g

Agar 2 g

위의 성분을 증류수 90 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 121℃ 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 RPF Supplement를 첨가한다.

Bovine Fibrinogen 0.375 g

Trypsin Inhibitor 2.5 mg

Rabbit Plasma 2.5 mL

Potassium Tellurite 2.5 mg

위의 성분을 멸균증류수 10 mL에 녹인다.

68) Bolton 배지(Bolton Broth)

Meat Pepton 10 g

Lactalbumin Hydrolysate 5 g

Yeast Extract 5 g

Sodium Chloride 5 g

Haemin 0.01 g

Sodium Pyruvate 0.5 g

α-Ketoglutaric acid 1 g

Sodium Metabisulphite 0.5 g

Sodium Carbonate 0.6 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 7.4로 조정한 후 121℃ 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 용혈시킨 말 혈액(Lysed Horse Blood) 50ml을 무균적으로 첨가하고 다음의 Supplement를 물과 에탄올을 동량 섞은 용액 10ml에 녹인 후 여과멸균하여 가한다.

Supplement 조성 : Sodium Cefoperazone 20 mg, Trimethoprim 20 mg, Vancomycin 20 mg, Cyclohexamide 50 mg

69) 세균수 건조필름배지 Ⅱ

Peptone 5 g

Bonito meat extract(Erlich meat extract) 1 g

Yeast extract 2.5 g

Glucose 1 g

Potassium hydrogen phosphate 0.8 g

2,3,5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride 0.05 g

위의 성분을 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

70) 대장균군 건조필름배지 Ⅱ

Peptone 2 g

Bonito meat extract(Erlich meat extract) 8 g

Gall powder 1.5 g

Sodium deoxycholate 1 g

Sodium dodecyl sulfate 1 g

Potassium nitrate 1 g

Potassium hydrogen phosphate 1 g

Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside 0.03 g

5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-β-D-galactopyranoside 0.5 g

위의 성분을 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

71) 대장균 건조필름배지 Ⅱ

Peptone 2 g

Bonito meat extract(Erlich meat extract) 8 g

Gall powder 1.5 g

Sodium deoxycholate 1 g

Sodium dodecyl sulfate 1 g

Potassium nitrate 1 g

Potassium hydrogen phosphate 1 g

Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside 0.03 g

5-bromo-4-chloro-3-indoxyl-β-D-galactopyranoside 0.5 g

6-chloro-3indoxyl-β-D-glucuronic acid 0.5 g

위의 성분을 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하여 건조필름을 제조한다.

72) MMGM(Minerals modified glutamate medium)

Lactose 10.0 g

L(+) Glutamic acid 6.35 g

L(+) Arginine monohydrochloride 0.02 g

L(-) Aspartic acid 0.024 g

L(-) Cystine 0.02 g

Sodium formate 0.25 g

Disodium potassium hydrogen phosphate 0.9 g

Ammonium chloride 2.5 g

Magnesium sulphate heptahydrate 0.1 g

Calcium chloride dihydrate 0.01 g

Ferric citrate scales 0.01 g

Nicotinic acid 0.001 g

Thiamine (Aneurinhydrochloride) 0.001 g

Pantothenic acid 0.001 g

Bromocresol purple 0.01 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.7 ± 0.1로 조정한 후 시험관에 10 mL 씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

73) BCIG 한천배지(5-bromo-4-chloro-3indolyl-β-D-glucuronide (BCIG) agar)

Tryptone 20.0 g

Bile salts No. 3 1.5 g

Agar 15.0 g

BCIG (as cyclohexylammonium salt) 0.075 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

74) mTSB 배지

Peptone from casein 17.0 g

Peptone from soymeal 3.0 g

Sodium chloride 1.5 g

Bile salts No. 3 2.5 g

D(+)glucose 2.5 g

Di-potassium hydrogen phosphate 4.0 g

위의 성분에 증류수를 가하여 1,000 mL로 만들고 끓여 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균하고 pH 7.3으로 조정하여 사용한다. 단, O157 검사 시 또는 오염이 심한 검체의 경우, 위의 mTSB 배지(배지 74)를 50℃로 식힌 후, 8 mg/L농도의 여과멸균한 Novobiocin을 첨가하여 사용할 수 있다.

75) Preston 한천배지(Preston Agar)

Lab-Lemcopowder 10.0 g

Peptone 10.0 g

Sodium chloride 5.0 g

Agar 12.0 g

증류수 1,000 mL에 위의 성분 37.0 g을 녹이고 pH 7.5±0.2로 조정을 한 다음 121℃에서 15분간 고압증균 멸균한 후 50℃로 식힌다. Laked Horse Blood 52.6 mL과 지시대로 녹인 Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

Supplement 조성

PolymyxinB 5,000 IU

Rifampicin 10 mg

Trimethoprim 10 mg

Cycloheximide 100 mg

76) Campy Cefex 한천배지(Campy Cefex Agar(CCA))

Brucella Agar(Difco 배지) 44.0 g

Ferrous sulfate 0.5 g

Sodium pyruvate 0.5 g

Sodium bisulfite 0.25 g

위의 성분을 증류수로 990 mL되게 용해하고 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 Cefoperazone 10 mL 및 Cycloheximide(200 mg/L)을 첨가한다.

77) Blaser's Campylobacter 한천배지(Blaser's Campylobacter Agar(BCA))

Yeast extract 5.0 g

Peptone 15.0 g

NaCl 5.0 g

Agar 12.0 g

Liver digest 2.5 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL되게 용해하여 pH 7.0로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 용혈된 말혈구(horse blood cell) 50 mL과 Campylobacter Supplement (A) (유제품의 경우 사용가능)를 권장량이 되게 첨가한다.

78) Preston 배지(Preston broth)

Lab-Lemco powder 10.0 g

Peptone 10.0 g

Sodium chloride 5.0 g

증류수 1,000 mL에 위의 성분을 녹이고 pH 7.5±0.2로 조정을 한 다음 121℃에서 15분간 고압증균 멸균한 후 50℃로 식힌다. Laked Horse Blood 52.6 mL과 지시대로 녹인 Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

Supplement 조성

Polymyxin B 5,000 IU

Rifampicin 10.0 mg

Trimethoprim 10.0 mg

Cycloheximide 100.0 mg

79) 혈액한천배지(Blood Agar)

Tryptone 15.0 g

Agar 15.0 g

NaCl 5.0 g

Soytone 5 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL로 만들고 가열 용해한 후 pH 7.3이 되도록 맞춘 다음 121℃로 15분간 고압증기 멸균한다. 고압멸균 시킨 배지를 약 50℃로 냉각시킨 후 양의 탈 섬유소 혈액을 5%(50 mL)가 되도록 첨가한 다음 사용한다.

80) Lowenstein-Jensen 사면배지

Asparagine 3.6 g

Monopotassium Phosphate 2.4 g

Magnesium Sulfate 0.24 g

Magnesium Citrate 0.6 g

Potato Flour 30.0 g

Malachite Green 0.4 g

위의 성분을 glycerol 12 mL을 함유한 증류수 600 mL에 가하여 배지가 끓기 직전까지 열을 가하면서 완전히 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한 후 50℃정도가 되도록 식힌다. 이 때 1,000 mL의 오염되지 않은 전란(whole egg)을 준비하여 거품이 생기지 않도록 잘 섞은 후 위의 배지에 거품이 생기지 않도록 잘 섞어준다. 뚜껑이 있는 튜브(screw-capped tube)에 섞은 배지를 분주한 후 사면배지가 되도록 잘 고정시켜 응고시킨 후 85℃에서 45분간 농축시킨다.

81) Middlebrook 7H10 한천배지

Ammonium Sulfate 0.5 g

Monopotassium Phosphate 1.5 g

Disodium Phosphate 1.5 g

Sodium Citrate 0.4 g

Magnesium Sulfate 25.0 mg

Calcium Chloride 0.5 mg

Zinc Sulfate 1.0 mg

Copper Sulfate 1.0 mg

L-Glutamic Acid (sodium salt) 0.5 g

Ferric Ammonium Citrate 0.04 g

Pyridoxine Hydrochloride 1.0 mg

Biotin 0.5 mg

Malachite Green 250.0 μg

Agar 15.0 g

* BBL Middlebrook OADC Enrichment

Sodium Chloride 8.5 g

Dextrose 20.0 g

Bovine Albumin (Fraction V) 50.0 g

Catalase 0.03 g

Oleic Acid 0.6 mL

Middlebrook 7H10 powder 19 g에 증류수를 900 mL과 glycerol 5 mL을 가하고 잘 섞은 후 완전히 녹이기 위하여 1분간 끓인 다음 121℃에서 15분간 멸균한다. 50∼55℃까지 식힌 후 무균적으로 Middlebrook OADC Enrichment를 100 mL 섞는다.

82) Serum Dextrose 배지(Serum Dextrose broth)

Tryptose 10 g

Beef extract 3 g

NaCl 5 g

증류수 950 mL을 가하고 121℃에서 15분간 멸균한 후 56℃에서 30분간 불활성화(inactivation)한 horse serum 과 dextrose 50 g을 첨가한다.

83) Serum Dextrose 한천배지(Serum Dextrose Agar)

Peptone 10.0 g

Meat extract 5.0 g

Sodium chloride 5.0 g

Agar 20.0 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL로 만들고 pH 7.4가 되도록 조정한 다음 121℃로 15분간 고압증기 멸균한 후 약 50℃의 항온수조에 보관한다. Fetal bovine serum 100 mL내에 Dextrose 20 g을 녹이고 여과하여 제조한 것 50 mL을 배지에 첨가한다. 일반세균의 증식을 억제하기 위하여 배지에 Bacitracin(25 units/mL), Vancomycin (20 ㎍/mL), Polymyxin B(5 units/mL, Nalidixic acid(5 ㎍/mL)과 Cycloheximide(100 ㎍/mL)을 첨가한다.

84) Brucella 한천배지(Brucella Agar)

Pancreatic Digest of Casein 10.0 g

Peptic Digest of Animal Tissue 10.0 g

Dextrose 1.0 g

Yeast Extract 2.0 g

Sodium Chloride 5.0 g

Sodium Bisulfite 0.1 g

Agar 15.0 g

증류수를 1,000 mL 가하고, 완전히 녹이기 위해 1분간 가열한 뒤 121℃에서 15분간 멸균한 후 fibrin을 제거한 (비동화: 56℃, 30분 동안 가열) bovine serum을 5～10% 되도록 첨가한다.

85) Brucella 배지(Brucella broth)

Pancreatic Digest of Casein 10.0 g

Peptic Digest of Animal Tissue 10.0 g

Dextrose 1.0 g

Yeast Extract 2.0 g

Sodium Chloride 5.0 g

Sodium Bisulfite 0.1 g

증류수를 1,000 mL 가하고, 끓여서 녹인 뒤 121℃에서 15분간 멸균한 후 fibrin을 제거한 (비동화: 56℃, 30분동안 가열) bovine serum을 5～10% 되도록 첨가한다.

86) 피루베이트 고형배지(pyruvate-based solid medium)

Enzyme Digest of Casein 3.6 g

Monopotassium Phosphate 2.4 g

Magnesium Sulfate 0.24 g

Magnesium Citrate 0.6 g

Potato Flour 30.0 g

Malachite Green 0.4 g

위의 성분을 Sodium pyruvate 7.2 g을 함유한 증류수 600 mL에 가하여 배지가 끓기 직전까지 열을 가하면서 완전히 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한 후 50℃정도가 되도록 식힌다. 이 때 1,000 mL의 오염되지 않은 전란(whole egg)을 준비하여 거품이 생기지 않도록 잘 섞은 후 위의 배지에 거품이 생기지 않도록 잘 섞어준다. 뚜껑이 있는 튜브(screw-capped tube)에 섞은 배지를 분주한 후 사면배지가 되도록 잘 고정시켜 응고시킨 후 85℃에서 45분간 농축시킨다.

87) MRS 배지

Enzyme Digest of Casein 10 g

Meat Extract 10 g

Yeast Extract 4 g

Glucose 20 g

Tween 80 1.08 g

Triammonium Citrate 2 g

Sodium Acetate 5 g

Magnesium Sulfate 7H2O 0.2 g

Manganese Sulfate 4H2O 0.05 g

Dipotassium hydrogen Phosphate 2 g

Agar 15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 5.7±0.1로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

88) Tetrathionate 배지(Tetrathionate Broth)

(1) Tetrathionate broth base

Polypeptone 5 g

Bile salts 1 g

Calcium carbonate 10 g

Sodium thiosulfate･5H2O 30 g

Distilled water 1 L

1,000 mL 멸균증류수에 배지성분을 부유시켜서 섞은 후 끓인다(배지성분이 침전되어 있으면 녹지 않는다). 최종 pH가 8.4±0.2가 되도록 한 뒤 45℃이하로 식혀서 5～8℃에 보관한다.

(2) Iodine-potassium iodide (I-KI) solution

Potassium iodide 5 g

Iodine, resublimed 6 g

Distilled water, sterile 20 mL

5 mL의 멸균증류수에 Potassium iodide를 용해시킨 뒤 iodine을 첨가하고 완전히 녹인 후 증류수를 가하여 20 mL로 한다.

(3) Brilliant green solution

Brilliant green dye, sterile 0.1 g

Distilled water, sterile 100 mL

사용하려고 하는날, 20 mL의 I-KI 용액과 10 mL의 Brilliant green 용액을 Tetrathionate broth base에 첨가하고 서서히 교반하면서 배지침전물들을 재부유시킨 뒤 20×150 ㎜ 또는 16×150 ㎜의 멸균된 시험관에 무균적으로 10 mL씩 분주한다. 배지에 I-KI와 dye 용액을 첨가한 뒤에는 가열해서는 아니 된다.

89) RVS 배지(Rappaport-Vassiliadis soya peptone Broth)

Soya peptone 4.5 g

Sodium Chloride 7.2 g

Potassium Dihydrogen Phosphate 1.26 g

Di-Potassium Dihydrogen Phosphate 0.18 g

Magnesium Chloride, Anhydrous 13.58 g

Malachite Green Oxalate 0.036 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 5.6±0.2로 조정하고 잘 섞어 배지가 녹을 때까지 끓인 후 10 mL씩 분주하여 115℃에서 15분간 멸균한다.

90) BG Sulfa 한천배지(Brilliant Green Sulfa Agar)

Yeast extract 3 g

Protease Peptone No.3 10 g

Lactose 10 g

Saccharose 10 g

Sodium Sulfapyridine 1.0 g

Sodium chloride 5.0 g

Agar 20 g

Brilliant Green 0.0125 g

Phenol Red 0.08 g

위의 성분 59 g을 증류수 1,000 mL에 넣고 pH 6.9로 조정하고 분말이 완전히 용해 되도록 1분간 끓인다. 과도히 가열하면 선택성이 떨어지므로 주의한다. 고압증기 멸균하여 사용한다.

91) HE 한천배지(Hektoen Enteric Agar)

Peptone 12 g

Yeast extract 3 g

Bile salts No. 3 9 g

Lactose 12 g

Sucrose 12 g

Salicin 2 g

NaCl 5 g

Sodium thiosulfate 5 g

Ferric ammonium citrate 1.5 g

Bromthymol blue 0.065 g

Acid fuchsin 0.1 g

Agar 14.0 g

Distilled water 1 L

가끔 교반시키면서 약 1분 동안 가열한 뒤 항온수조에서 냉각시킨다. 페트리접시(Petridish)에 20 mL씩 분주하고 뚜껑을 열고 2시간가량 굳힌다. 최종 pH는 7.6±0.2로 하고, 1일 이상 보관해서는 아니 된다.

92) XLT4 한천배지(XLT4 Agar)

Proteose Peptone No.3 1.6 g

Yeast Extract 3.0 g

L-Lysine 5.0 g

Xylose 3.75 g

Lactose 7.5 g

Saccharose 7.5 g

Ferric Ammonium Citrate 0.8 g

Sodium Thiosulfate 6.8 g

Sodium Chloride 5.0 g

Agar 18.0 g

Phenol Red 0.08 g

위의 성분 59 g을 증류수 1,000 mL에 넣고 여기에 4.6 mL XLT Agar supplement를 넣고 분말이 완전히 용해되도록 1분간 끓인다. 마지막 pH는 7.4±0.2로 맞추고 고압증기멸균은 하지 않는다.

93) LIA 사면배지(Lysine Iron Agar)

Peptone 5.0 g

Yeast Extract 3.0 g

Dextrose 1.0 g

L-Lysine HCl 10.0 g

Ferric Ammonium Citrate 0.5 g

Sodium Thiosulfate 0.04 g

Bromcresol Purple 0.02 g

Agar 15.0 g

위 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 pH 6.7±0.2로 조정하고 121℃, 12분간 멸균한다.

94) EC-MUG 배지

EC 배지 l,000 mL에 MUG(4-methylumbelliferyl-β-d-glucuronide) 50 ㎎을 첨가하여 시험관에 분주하여 121℃에서 15분간 멸균한다.

95) Lauryl Sulfate Tryptose (LST) Broth

Tryptose or trypticase 20 g

Lactose 5 g

K2HPO4 2.75 g

NaCl 5 g

Sodium lauryl sulfate 0.1 g

위의 성분을 증류수로 1,000 mL 되게 제조하여 pH 6.8로 조정한 다음 발효관(Duram tube)을 넣은 시험관에 10 mL씩 분주하고, 고압증기멸균한다. 필요에 따라 MUG 50 ㎎을 첨가하여 사용한다.(LST-MUG)

96) Violet Red Bile Agar(VRBA)

Yeast extract 3.0 g

Peptone 7.0 g

Lactose 10.0 g

Bile salts No.3 1.5 g

Sodium chloride 5.0 g

Neutral red 0.03 g

Crystal violet 0.002 g

Agar 15.0 g

위의 성분에 증류수를 가하여 1,000mL로 만들고 pH 7.3～7.5가 되도록 맞춘 다음 2분간 끓여서 용해시켜 사용한다. 멸균은 하지 않는다.

97) ITC 배지(Irgasan, Ticarcillin and potassium chlorate broth)

Enzymatic digest of casein 10.0 g

Yeast extract 1.0 g

Magnesium chloride hexahydrate(MgCl2.6H2O) 60.0 g

Sodium Chloride 5.0 g

Malachite green, 0.2% aqueous solution 5.0 mL

위의 성분을 증류수 1000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정하고, 988 mL를 취하여 121℃에서 15분간 멸균하여 식힌 후, 다음의 Supplement들을 가한다.

Supplement: Ticarcillin solution 1 mL(Ticarcillin 10 mg을 증류수 10 mL에 녹여 여과멸균한 것), Irgasan solution 1 mL(Triclosan 10 mg을 95% Ethanol 10 mL에 녹인 것), Potassium chlorate solution 10 mL(Potassium chlorate 10 g을 증류수 100 mL에 녹여 여과 멸균한 것)

98) PEMBA한천배지(Polymyxin pyruvate egg yolk mannitol bromothymol blue Agar)

Enzymatic digest of casein 1.0 g

Mannitol 10.0 g

Sodium Chloride 2.0 g

Magnesium Sulfate 0.1 g

Disodium hydrogen phosphate 2.5 g

Potassium dihydrogen phosphate 0.25 g

Sodium Pyruvate 10.0 g

Bromothymol Blue 0.12 g

Agar 9∼18 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다. 50°C로 식힌 다음 Polymyxin B 용액 100,000 IU와 난황액(시액 8) 50 mL를 각각 넣어 혼합한다.

99) CCI 한천배지(Chomogenic Cronobacter Isolation agar

Tryptic digest of casein 7.0 g

Yeast extract 3.0 g

Sodium chloride 5.0 g

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-α-D-glucopyranoside 0.15 g

Sodium desoxychloate 0.25 g

Ammonium iron(Ⅲ) citrate 1 g

Sodium thiosulfate 1 g

Agar 9∼18.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.3 ± 0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다.

100) ALOA 한천배지(Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti)

Enzymatic Digest of Animal Tissues 18.0 g

Enzymatic Digest of Casein 6.0 g

Yeast Extract 10.0 g

Sodium Pyruvate 2.0 g

Glucose 2.0 g

Magsesium Glycerophosphate 1.0 g

Magesium Sulfate(anhydrous) 0.5 g

Sodium Chloride 5.0 g

Lithium Chloride 10.0 g

Disodium Hydrogen Phophate(anhydrous) 2.5 g

5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucopyranoside 0.05 g

Agar 12.0-18.0 g

위 성분을 증류수 930 mL에 녹이고 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 50℃정도로 식히고 다음의 추가성분을 가한다. Supplement ①∼④는 여과 멸균하여 각 5 mL씩 가하고, Supplement ⑤는 121℃에서 15분간 멸균하여 50mL을 가한다.

ALOA agar Supplement: ① Nalidixic acid solution(0.02 g/5 mL), ② Ceftazidime solution(0.02 g/5 mL), ③ Polymyxin B solution(76700 IU/5 mL), ④ Cycloheximide solution(0.05 g/50% Ethanol 5 mL) ⑤ L-α-phosphatidylinositol solution(2 g/50 mL)

※ ④ Cycloheximide solution 대신 Amphotericin B solution(0.01 g/1M HCl 2.5 mL과 Dimethylformamide 7.5 mL 혼합용액)을 사용할 수 있다. 단, Amphotericin B solution을 사용할 경우 위의 배지 성분을 증류수 925 mL에 녹인다.

101) mCPC 한천배지(Modified Cellobiose- Polymyxin B-Colistion agar)

Peptone 10.0 g

Beef extract 5.0 g

Sodium chloride 20.0 g

1000× Dye stock solution* 1.0 mL

Agar 15.0 g

위 성분을 증류수 900 mL에 녹이고 pH 7.6으로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 50℃ 정도로 식히고 supplement 용액을 첨가한다.

※ mCPC agar supplement 용액: Cellobiose 10.0g을 증류수 100 mL에 천천히 가열하여 녹인후 식힌다. Polymyxin B 100,000 units과 Colistin 400,000 units을 가한다.

* 1000× Dye stock solution: Bromothymol blue 4.0 g과 Cresol red 4.0 g을 95% ethanol 100 mL에 녹여서 제조