4.7.2 정량시험
 
  
가. 최확수법
 
  
최확수란 이론상 가장 가능한 수치를 말하여 동일 희석배수의 시험용액을 배지에 접종하여 대장균군의 존재 여부를 시험하고 그 결과로부터 확률론적인 대장균군의 수치를 산출하여 이것을 최확수(MPN)로 표시하는 방법이다. 최확수는 연속한 3단계 이상의 희석시료(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)를 각각 5개씩(별표 1) 또는 3개씩(별표 2) 발효관에 가하여 배양 후 얻은 결과에 의하여 검체 1 mL중 또는 1 g중에 존재하는 대장균군수를 표시하는 것이다.
 
  
예로 검체 또는 희석검체의 각각의 발효관을 5개씩 사용하여 다음과 같은 결과를 얻었다면 최확수표에 의하여 시험검체 1 mL중의 MPN은 70으로 된다. 이 때 접종량이 1, 0.1, 0.01 mL일 때에는 70/10=7로 한다. 10, 1, 0.1 mL일 때에는 70/100=0.7로 한다.
 
  
 
   
 
    
 
     
 
시험용액 접종량
 
 
     
 
0.1 mL
 
 
     
 
0.01 mL
 
 
     
 
0.001 mL
 
 
     
 
MPN
 
 
    
 
    
 
     
 
가스발생양성관수
 
 
     
 
5 개
 
 
     
 
2 개
 
 
     
 
1 개
 
 
     
 
70
 
 
    
 
   
 
  
 
  
시험용액 접종이 4단계 이상으로 행하여졌을 때에는 다음 표와 같이 취급한다.
 
  
 
   
 
    
 
     
 
예
 
 
     
 
가스발생 양성관수
 
 
     
 
유효숫자
 
 
    
 
    
 
     
 
1 mL
 
 
     
 
0.1 mL
 
 
     
 
0.01 mL
 
 
     
 
0.001 mL
 
 
     
 
1 mL
 
 
     
 
0.1 mL
 
 
     
 
0.01 mL
 
 
     
 
0.001 mL
 
 
    
 
    
 
     
 
I
 
 
     
 
5
 
 
     
 
5
 
 
     
 
2
 
 
     
 
0
 
 
     
 
-
 
 
     
 
5
 
 
     
 
2
 
 
     
 
0
 
 
    
 
    
 
     
 
II
 
 
     
 
5
 
 
     
 
4
 
 
     
 
3
 
 
     
 
0
 
 
     
 
5
 
 
     
 
4
 
 
     
 
3
 
 
     
 
-
 
 
    
 
    
 
     
 
III
 
 
     
 
0
 
 
     
 
1
 
 
     
 
0
 
 
     
 
0
 
 
     
 
0
 
 
     
 
1
 
 
     
 
0
 
 
     
 
-
 
 
    
 
    
 
     
 
IV
 
 
     
 
5
 
 
     
 
3
 
 
     
 
1
 
 
     
 
1
 
 
     
 
5
 
 
     
 
3
 
 
     
 
2
 
 
     
 
-
 
 
    
 
   
 
  
 
  
1)유당배지법 
 
 
  
4.3 제조법에 따른 연속한 3단계 이상의 희석시료(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)를 5개 또는 3개씩의 유당배지(배지 2)에 접종한다. 단, 10 mL를 접종할 때에는 2배 농도 유당 배지를 사용하고 0.1 mL 이하를 접종할 필요가 있을 때에는 10배 희석단계액을 각각 1 mL씩 사용한다. 시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 가스발생 발효관 각각에 대하여 추정, 확정, 완전시험을 행하고 대장균군의 유무를 확인한 다음 최확수표로부터 검체 1 mL 또는 1 g중의 대장균군수를 구한다. 이때 시험용액을 가한 배지의 전부 또는 대부분에서 가스발생이 인정되거나 또 최소량을 가한 배지의 전부 또는 대부분이 가스가 발생되지 않도록 접종량과 희석도를 고려하여야 한다
 
  
2)BGLB배지법 
 
 
  
4.3 제조법에 따른 연속한 3단계 이상의 희석시료(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)를 5개 또는 3개씩 BGLB 배지(배지 3)에 각각 접종한다. 단, 10 mL를 접종할 때에는 2배 농도 BGLB 배지를 사용하고 0.1 mL 이하를 접종할 필요가 있을 때에는 10배 희석단계액을 각각 1 mL씩 사용한다. 시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액을 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다.이때 시험용액을 가한 배지의 전부 또는 대부분에서 가스발생이 인정되거나 또 최소량을 가한 배지의 전부 또는 대부분이 가스가 발생되지 않도록 접종량과 희석도를 고려하여야 한다.이하의 조작은 각 발효관에 대하여 BGLB 배지에 의한 정성시험법에 따라 하고 대장균군의 유무를 확인한 다음 최확수표로부터 검체 1 mL 또는 1 g중의 대장균군수를 산출한다.
 
  
나. 데스옥시콜레이트유당한천배지법
 
  
4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 각 10배 단계 희석액 1 mL에 대하여 이 배지에 의한 정성시험법과 같은 조작으로 35～37℃에서 24±2시간 배양한 후 생성된 집락중 전형적인 집락 또는 의심스러운 집락에 대하여 정성시험 때와 같은 조작으로 대장균군의 유무를 결정한다. 시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 균수 산출은 4.5.1 일반세균수에 따라 한다.
 
  
다. 건조필름법
 
  
4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL와 각 10배 단계 희석액 1 mL를 2매 이상씩 대장균군 건조필름배지Ⅰ(배지 54) 또는 대장균군 건조필름배지Ⅱ(배지 70)에 접종한 후, 35±1℃에서 24±2시간 배양한다. 시험용액을 가하지 아니한 동일 희석액 1 mL를 대조시험액으로 하여 시험조작의 무균여부를 확인한다. 대장균군 건조필름배지Ⅰ에서는 붉은 집락 중 주위에 기포를 형성한 집락수를 계산하고, 대장균군 건조필름배지Ⅱ에서는 청색 및 청녹색의 집락수를 계산하여 그 평균집락수에 희석배수를 곱하여 대장균군 수를 산출한다. 균수 산출 및 기재보고는 4.5.1 일반세균수에 따라 한다.
 
  
라. 자동화된 최확수법(Automated MPN)
 
  
우유류, 유당분해우유, 가공유(무지유고형분 5.5%미만인 제품제외), 발효유류, 가공치즈, 조제유류, 분유류, 건조저장육류, 식육추출가공품, 알가열제품 검사에 한한다.