.1.2.17 아크리나트린(Acrinathrin), 할펜프록스(Halfenprox)
 
  
 가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
 
  
 나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.
 
  
 다. 장치
 
  
 1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)
 
  
 2) 기체/액체크로마토그래프-질량분석기(GC/LC-MS)
 
  
 라. 시약 및 시액
 
  
 1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
 
  
 3) 표준원액 : 표준품을 각각 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.
 
  
 4) 표준용액 : 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.
 
  
 5) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.
 
  
 6) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 마. 시험용액의 조제
 
  
 1) 추출
 시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 여과액과 합친다. 합친 여과액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다. ※ 지방성 시료의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 헥산 10 mL로 녹인다.
 
  
 2) 정제
 안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리 컬럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 건식 충전한 후 헥산 25 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 고정상 상단에 넣어 헥산 5 mL로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 : 헥산(25 : 75) 혼합액 50 mL로 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄 : 아세토니트릴 : 헥산(50 : 0.35 : 49.65) 혼합액 50 mL로 용출하여 감압농축플라스크에 취한다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물에 헥산 10 mL로 녹인다.
 
  
 바. 시험조작
 
  
 1) 기체크로마토그래프의 분석조건
 
  
 가) 컬럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것
 
  
 나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 10 mL/분
 
  
 다) 주입부 온도 : 260℃
 
  
 라) 오븐 온도 : 220℃
 
  
 마) 검출기 온도 : 300℃
 
  
 바) 주입모드 : 직접주입
 
  
 사) 주입량 : 2 μL
 
  
 2) 검량선의 작성
 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
 
  
 3) 표준품의 크로마토그램
 
  
 
 
  
 그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.
 
  
 1 : 아크리나트린(17.9분), 2 : 할펜프록스(24.2분)
 
  
 4) 정량한계
 아크리나트린(0.01 mg/kg), 할펜프록스(0.02 mg/kg)
 
  
 사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
 
  
 아. 확인시험기체/액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로아크리나트린, 할펜프록스를확인한다.
 
  
 1) 기체크로마토그래프-질량분석기상의 분석조건
 
  
 가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것
 
  
 나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 2 mL/분
 
  
 다) 주입부 온도 : 260℃
 
  
 라) 오븐 온도 : 50℃에서 2분간 유지, 180℃까지 20℃/분 속도로 직선적 승온, 2분간 유지한 후 280℃까지 5℃/분 속도로 직선적 승온한다.
 
  
 마) 인터페이스 온도 : 300℃
 
  
 바) 주입모드 : Splitless mode
 
  
 사) 주입량 : 1 μL
 
  
 아) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 분석성분
 
 (Compound)
 
 
     
 
 머무름 시간
 
 (분)
 
 
     
 
 분자량
 
 (MW)
 
 
     
 
 이온
 
 (m/z)
 
 
    
 
    
 
     
 
 아크리나트린
 
 (Acrinathrin)
 
 
     
 
 27.0
 
 
     
 
 541.4
 
 
     
 
 181, 208, 289
 
 
    
 
    
 
     
 
 할펜프록스
 
 (Halfenprox)
 
 
     
 
 30.0
 
 
     
 
 477.3
 
 
     
 
 263, 265, 183