7.1.2.20 메토밀(Methomyl), 티오디카브(Thiodicarb)
 
  
 가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
 
  
 나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
 
  
 다. 장치
 
  
 1)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
 
  
 라. 시약 및 시액
 
  
 1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
 
  
 3) 표준원액 : 메토밀 및 티오디카브 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
 
  
 4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.
 
  
 5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 마. 시험용액의 조제
 
  
 1) 추출
 시료 20 g을 정밀히 달아 250 mL 원심분리용 용기에 넣고 (곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토 니트릴 100 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 섞어 추출한 다. 이에 염화나트륨 10 g을 넣어 2분간 강하게 흔들고, 3,500 rpm에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.
 
  
 2) 정제
 아세토니트릴층 6 mL를 취하여 무수황산마그네슘 900 mg 및 1차 2차 아민 150 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 용량의 용기에 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 취하여 시험용액으로 한다. 주1) 티오디카브는 곡류 및 두류에서 습윤화 과정 중에 가수분해되어 2분자의 대사산물인 메토밀로 대사되므로 분자량 차이에 따른 보정계수 0.92를 곱하여 메토밀로 표시한다. 메토밀 총 잔류량 = 메토밀 잔류량 + 티오디카브 잔류량 × (메토밀 분자량 162.2/티오디카브 분자량 354.5 × 2 = 0.92)
 
  
 바. 시험조작
 
  
 1) 액체크로마토그래프 분석조건
 
  
 가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것
 
  
 나) 컬럼 온도 : 40℃
 
  
 다) 이동상
 
  
 (1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴
 
  
 (2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물
 
  
 (3) 농도구배조건
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 시간(분)
 
 
     
 
 A(%)
 
 
     
 
 B(%)
 
 
    
 
    
 
     
 
 0.0
 
 
     
 
 10
 
 
     
 
 90
 
 
    
 
    
 
     
 
 0.5
 
 
     
 
 10
 
 
     
 
 90
 
 
    
 
    
 
     
 
 3.0
 
 
     
 
 95
 
 
     
 
 5
 
 
    
 
    
 
     
 
 4.0
 
 
     
 
 95
 
 
     
 
 5
 
 
    
 
    
 
     
 
 4.5
 
 
     
 
 10
 
 
     
 
 90
 
 
    
 
    
 
     
 
 6.0
 
 
     
 
 10
 
 
     
 
 90
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 라) 이동상 유속: 0.2 mL/분
 
  
 마) 주입량 : 5 μL
 
  
 2) 질량분석기 분석조건
 
  
 가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
 
  
 나) Capillary voltage : 4.5 kV
 
  
 다) Collision gas : 아르곤(Ar)
 
  
 라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 분석성분
 
 (Compound)
 
 
     
 
 분자량
 
 (MW)
 
 
     
 
 관측질량
 
 (Exact mass)
 
 
     
 
 선구이온
 
 (Precursor ion,m/z)
 
 
     
 
 생성이온(Product ion,m/z)
 
 
     
 
 충돌에너지
 
 (Collision energy, eV)
 
 
    
 
    
 
     
 
 메토밀
 
 (Methomyl)
 
 
     
 
 162.2
 
 
     
 
 162.0
 
 
     
 
 163
 
 
     
 
 881)
 
 
     
 
 -9
 
 
    
 
    
 
     
 
 106
 
 
     
 
 -10
 
 
    
 
    
 
     
 
 티오디카브
 
 (Thiodicarb)
 
 
     
 
 354.5
 
 
     
 
 354.0
 
 
     
 
 355
 
 
     
 
 881)
 
 
     
 
 -16
 
 
    
 
    
 
     
 
 108
 
 
     
 
 -16
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 1)정량이온
 
  
 3) 검량선 작성
 농도별 표준용액을 일정량 취하여 무처리 시료추출 용액과 각각 혼합한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
 
  
 4) 표준품의 크로마토그램
 
  
 
 
  
 그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
 
  
 A : 메토밀(3.3분), B : 티오디카브(3.9분)
 
  
 5) 정량한계
 0.01 mg/kg
 
  
 사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
 
  
 아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 메토밀 및 티오디카브를 확인한다.