7.1.2.22 사이할로프뷰틸(Cyhalofop-butyl), 피리데이트(Pyridate), 퀴잘로포프에틸(Quizalofop-ethyl)
 
  
 가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.
 
  
 나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
 
  
 다. 장치
 
  
 1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
 
  
 라. 시약 및 시액
 
  
 1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
 
  
 3)표준원액 : 사이할로포프뷰틸, 피리데이트, 퀴잘로포프에틸 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.
 
  
 4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).
 
  
 5) d-SPE : Z-Sep(Zirconium dioxide-based sorbent)
 
  
 6)기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 마. 시험용액의 조제
 
  
 1) 추출
 시료를 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 아세토니트릴 20 mL를 넣고(곡류 및 두류의 경우 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL를 넣고 30분간 방치한 후 아세토니트릴 10 mL 넣음) 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨․1.5 수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨․2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔든 후 4℃, 4,000 G에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.
 
  
 2) 정제
 Z-Sep 75 mg이 담겨 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’에서 얻은 상층액 1.5 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 상층액과 메탄올을 1 : 1로 혼합하고 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.
 
  
 바. 시험조작
 
  
 1) 액체크로마토그래프 분석조건
 
  
 가) 컬럼 :C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것
 
  
 나) 컬럼 온도 : 40℃
 
  
 다) 이동상
 
  
 (1) 이동상 A : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄 함유 메탄올
 
  
 (2) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄 함유 물
 
  
 (3) 농도구배조건
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 시간(분)
 
 
     
 
 A(%)
 
 
     
 
 B(%)
 
 
    
 
    
 
     
 
 0.0
 
 
     
 
 5
 
 
     
 
 95
 
 
    
 
    
 
     
 
 2.0
 
 
     
 
 5
 
 
     
 
 95
 
 
    
 
    
 
     
 
 4.0
 
 
     
 
 95
 
 
     
 
 5
 
 
    
 
    
 
     
 
 10.0
 
 
     
 
 95
 
 
     
 
 5
 
 
    
 
    
 
     
 
 12.0
 
 
     
 
 5
 
 
     
 
 95
 
 
    
 
    
 
     
 
 15.0
 
 
     
 
 5
 
 
     
 
 95
 
 
    
 
   
 
  
 
  
 라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분
 
  
 마) 주입량 : 5 μL
 
  
 2) 질량분석기 분석조건
 
  
 가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
 
  
 나) Capillary voltage : 3.9 kV
 
  
 다) Collision gas : 아르곤(Ar)
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 분석성분
 
 (Compound)
 
 
     
 
 분자량
 
 (MW)
 
 
     
 
 관측질량
 
 (Exact mass)
 
 
     
 
 선구이온
 
 (Precursor
 
 ion, m/z)
 
 
     
 
 생성이온(Product ion, m/z)
 
 
     
 
 충돌에너지
 
 (Collision energy, eV)
 
 
    
 
    
 
     
 
 사이할로포프뷰틸
 
 (Cyhalofop-butyl)
 
 
     
 
 357.4
 
 
     
 
 357.1
 
 
     
 
 358
 
 
     
 
 2561)
 
 
     
 
 10
 
 
    
 
    
 
     
 
 120
 
 
     
 
 26
 
 
    
 
    
 
     
 
 피리데이트
 
 (Pyridate)
 
 
     
 
 378.9
 
 
     
 
 378.1
 
 
     
 
 379
 
 
     
 
 2071)
 
 
     
 
 28
 
 
    
 
    
 
     
 
 351
 
 
     
 
 10
 
 
    
 
    
 
     
 
 퀴잘로포프에틸
 
 (Quizalofop-ethyl)
 
 
     
 
 372.8
 
 
     
 
 372.0
 
 
     
 
 373
 
 
     
 
 2991)
 
 
     
 
 20
 
 
    
 
    
 
     
 
 91
 
 
     
 
 32
 
 
    
 
   
 
  
 라)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온 
  
 1)정량이온
 
  
 3) 검량선 작성
 표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
 
  
 4) 표준품의 크로마토그램
 
  
 
 
  
 그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
 
  
 1. 사이할로포프뷰틸(9.6분), 2. 퀴잘로포프에틸(10.3분), 3. 피리데이트(12.8분)
 
  
 *분석기기 : LC(WatersⓇAlience 2695 LC separation module), MS/MS(WatersⓇMicromass Quattro Micro triple quadrupole tandem mass),
 
  
 컬럼(AgilentⓇZORBAX Eclipse Plus C18, 3.0 mm × 150 mm, 3.5 μm)
 
  
 5) 정량한계
 0.01 mg/kg
 
  
 사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
 
  
 아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 사이할로포프뷰틸, 피리데이트, 퀴잘로포프에틸을 확인한다.