7.1.3.17.1 분광광도계를 사용하는 방법
 
  
 가. 시험법 적용범위과일류, 채소류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.
 
  
 나. 분석원리시료를 하이드라진 증류시켜 증류액을 취하여 분광광도계로 측정한다.
 
  
 다. 장치
 
  
 1) 분광광도계
 
  
 2) 하이드라진 증류장치
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 A
 
 B
 
 C
 
 D
 
 E
 
 F
 
 G
 
 H
 
 I
 
 
     
 
 : 수류
 
 : 질소 유입구
 
 : 아스베스토 테이프
 
 : 온도계
 
 : 온도측정관
 
 : 증류플라스크
 
 : 냉각관
 
 : 플라스크
 
 : 유리제냉각조
 
 
    
 
   
 
  
 
   
  
 라. 시약 및 시액
 
  
 1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등 이상인 것
 
  
 2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
 
  
 3) 발색시약 : p-디메틸 아미노 벤즈 알데히드 2 g을 1 N 황산 100 mL에 녹인다.
 
  
 4) 표준품 : 말릭하이드라자이드(특급)를 물로 3회 재결정한다. 사용 시 조제한다.
 
  
 5) 표준원액 : 표준품을 0.1 N 수산화나트륨용액에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.
 
  
 6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
 
  
 마. 시험용액의 조제시료 5 g을 정밀히 달아 증류플라스크에 넣고 실리콘오일 1 mL, 수산화나트륨 50 g 및 물 40 mL를 넣는다. 온도측정관에 대두유 또는 비점이 높은 기름 1 mL를 넣고 온도계를 넣는다. 상기의 증류플라스크를 가열하여 20초마다 흔들어 주면서 수산화나트륨을 녹인다. 수산화나트륨을 넣은 후 온도가 160℃에 도달할 때까지의 시간이 11～15분이 되도록 가열을 조정하여 온도가 160℃에 도달한 시점에서 가열을 중지하여 방냉한다. 온도가 140℃가 된 시점에서 상기의 증류플라스크의 접합부를 마른 헝겊으로 더러운 곳을 닦아내어 건조시키고 아연 5 g 및 염화제일철 0.5 g을 넣고 즉시 접합부에 그리스를 얇게 발라 하이드라진 증류장치에 부착시킨다. 50 mL 플라스크에 발색시약 4 mL를 넣어 냉각관의 선단을 플라스크의 액 중에 담가 플라스크를 얼음물에서 냉각한다. 질소의 유속을 플라스크에서 매초 3기포가 발생하도록 조정한다. 냉각관도 얼음물을 흘려보낸다. 상기의 증류플라스크를 가열하여 끓기 시작해서 기포가 생길 때 기포는 증류플라스크의 2/3 이상 끓지 않게 가열을 조정한다. 온도가 173℃에 도달한 시점에서 물을 천천히 떨어뜨려 168℃가 된 시점에서 물을 떨어뜨리는 것을 중지한다. 이 조작을 반복하면서 증류하여 증류액 35 mL를 취한다. 염화제일철을 넣으면서 이 조작이 완료될 때까지의 시간이 15～20분이 되도록 조작 및 가열을 조정한다. 증류액이 혼탁할 경우에는 황산을 2 방울 넣어 흔들어 섞는다. 이 증류액에 물을 넣어 정확히 40 mL로 하여 시험용액으로 하고 10분 이내에 사. 정량시험에 따라 정량한다.
 
  
 바. 시험조작
 
  
 1) 검량선의 작성
 말릭하이드라자이드 표준원액을 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 및 1 mL를 각각 취해 0.1 N 수산화나트륨용액을 넣어 1 mL로 한다. 이를 마. 시험용액의 조제 및 사. 정량시험과 같은 방법으로 조작하여 검량선을 작성한다.
 
  
 2) 정량한계
 0.05 mg/kg
 
  
 사. 정량시험발색시약 4 mL에 물을 넣어 40 mL로 한 것을 대조액으로 하여 시험용액에 대하여 파장 430, 460 및 490 nm에 있어서의 흡광도를 측정하여 다음 식에 따라 보정흡광도를 구하여 바. 시험조작의 1) 검량선의 작성에 따라 말릭하이드라자이드의 함량을 구한다.
 
  
 
   
 
    
 
     
 
 보정흡광도 ＝ B-
 
 
     
 
 A＋C
 
 
    
 
    
 
     
 
 2
 
 
    
 
   
 
  
 A : 430 nm에 있어서의 흡광도B : 460 nm에 있어서의 흡광도C : 490 nm에 있어서의 흡광도