- ▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.3 축·수산물의 잔류물질 ▶ 7.3.2 단성분 시험법 (Individual residue method) ▶ 7.3.2.18 피디플루메토펜(Pydiflumetofen)
7.3.2.18피디플루메토펜(Pydiflumetofen)
가. 시험법 적용범위소고기, 소지방, 소부산물, 유, 알 등 축산물에 적용한다.
나. 분석원리시료를 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
다. 장치
1) 액체
크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)라. 시약 및 시액
1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).
5) d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction): 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 아세트산나트륨(C 2H3NaO2, sodium acetate), 흑연화탄소(GCB, Graphitized Carbon Black), C 18(octadecyl bonded silica ), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)
6) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것
마. 시험용액의 조제
1) 추출
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다. ★여기에 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 10 mL를 가한 뒤 5분간 강하게 흔든 후, 무수황산마그네슘 6 g, 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 5분간 강하게 흔들고, 4℃, 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. ※ 지방에 기준 설정된 시료의 경우 : 균질화한고기류 30～50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 취하고 무수황산나트륨 약 50 g을 넣어 흔들어 섞는 다. 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 넣어 5분 동안 추출 후 여과보조제(Celite 545)를 깔은 부흐너깔때기에서 감압여과 한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여과액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하의 감압에서 용매를 날린 후 정밀히 달아 ★ 이하 추출 과정을 따른다. 시료가 지방인 경우 적당량을 취하여 약 50℃로 가열하여 지방을 분리한 후 건조여과지 로 여과한 것을 정밀히 달아 ★ 이하 추출 과정을 따른다.2) 정제
무수황산마그네슘 1,200 mg과 흑연화탄소 45 mg, 1차 2차 아민 400 mg, C 18400 mg이 담긴 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴 층 전량을 넣고 5분간 강하게 흔들고 이를 4℃, 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm) 로 여과한 후 시험용액으로 한다.바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 : 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴
(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물
(3) 농도구배조건
| 시간(분) |
이동상 A(%) |
이동상 B(%) |
| 0.0 |
30 |
70 |
| 1.0 |
30 |
70 |
| 3.5 |
90 |
10 |
| 4.0 |
90 |
10 |
| 4.1 |
30 |
70 |
| 8.0 |
30 |
70 |
라)이동상 유속 : 0.3 mL/분
마)주입량 : 5 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
나) Capillary voltage : 5.5 kV
다) Collision gas : 질소(N2)
라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
| 분석 성분 (Compound) |
머무름 시간 (분) |
분자량 (MW) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precusor ion,m/z) |
생성이온 (Product ion,m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
| 피디플루메토펜 (Pydiflumetofen) |
5.08 |
426.7 |
425.0 |
426 |
1931) |
51 |
| 171 |
25 |
|||||
| 166 |
37 |
1)정량이온
3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
4) 표준품 크로마토그램
그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
피디플루메토펜 표준품(5.1분)
* 분석기기 : LC(SHISEIDO® Nanospace Nasca 2 system), MS/MS(AB Sciex® Triple Quad 4500),
컬럼(XBridgeⓇ C18, 2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm)
5) 정량한계
0.003 mg/kg
사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 피디플루메토펜을 확인한다.
