- ▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.3 축·수산물의 잔류물질 ▶ 7.3.2 단성분 시험법 (Individual residue method) ▶ 7.3.2.13 이미다클로프리드(Imidacloprid)
7.3.2.13이미다클로프리드(Imidacloprid)
가. 시험법 적용범위닭고기, 알 등 축산물에 적용한다.
나. 분석원리시료 중 이미다클로프리드 및 대사산물을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.
다. 장치
1)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액: 이미다클로프리드(imidacloprid) 및 대사산물 이미다클로프리드 우레아(imidacloprid urea), 이미다클로프리드 올레핀(imidacloprid olefin), 5-하이드록시 이미다클로프리드(5-hydroxy imidacloprid), 6-클로로니코티닉 엑시드(6-chloronicotinic acid) 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L
가 되게 한다.4) 표준용액:표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).
5) d-SPE :C18(octadecyl bonded silica)
6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급
마. 시험용액의 조제
1) 추출
시료(닭의 경우 피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위 100 g, 알의 경우 달걀, 오리알은 10개, 메추리알 20개 또는 이와 동등한 양)를 균질화한 후 5 g을 50 mL 용량의 원심분리관에 정확히 달아 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 15 mL를 넣어10분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 G에서 10분간 원심분리한다.2) 정제
새로운 15 mL 용량 원심분리관에 C 18400 mg을 넣고 ‘1) 추출’ 로부터 얻은 원심분리 상층액 중 6 mL를 넣어1분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃,4,000 G에서10분간 원심분리한다. 상층액 중 3 mL를 취하여 질소가스를 사용하여 농축, 건고한 후 잔류물에 1% 포름산 함유 50% 아세토니트릴 1 mL를 넣어 녹인 후 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼: C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도: 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴
(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 및 5 mM 아세트산암모늄 함유 물
(3) 농도구배조건
| 시간(분) |
A(%) |
B(%) |
| 0.0 |
5 |
95 |
| 2.0 |
5 |
95 |
| 4.0 |
90 |
10 |
| 4.5 |
70 |
30 |
| 6.0 |
70 |
30 |
| 7.0 |
5 |
95 |
| 8.0 |
5 |
95 |
라) 이동상 유속: 0.2 mL/분
마) 주입량: 5 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 방법: ESI positive-ion mode
나) Capillary voltage: 3.2 kV
다) Collision gas: 아르곤(Ar)
라) Cone voltage: 54 V(imidacloprid), 44 V(imidacloprid urea), 38 V(imidacloprid olefin), 58 V(5-hydroxy imidacloprid), 60 V(6-chloronicotinic acid)
마) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
| 분석성분 (Compound) |
분자량 (MW) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precursor ion,m/z) |
생성이온(Product ion,m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
| 이미다클로프리드 (Imidacloprid) |
255.7 |
255.0 |
256 |
2091) |
21 |
| 175 |
25 |
||||
| 128 |
20 |
||||
| 이미다클로프리드 우레아 (Imidacloprid urea) |
211.6 |
211.0 |
212 |
1281) |
18 |
| 99 |
18 |
||||
| 126 |
20 |
||||
| 이미다클로프리드 올레핀 (Imidacloprid olefin) |
253.6 |
253.0 |
254 |
2051) |
16 |
| 171 |
20 |
||||
| 152 |
16 |
||||
| 5-히드록시이미다클로프리드 (5-Hydroxy imidacloprid) |
271.7 |
271.0 |
272 |
1911) |
18 |
| 225 |
28 |
||||
| 146 |
32 |
||||
| 6-클로로니코틴산 (6-Chloronicotinic acid) |
157.6 |
156.9 |
158 |
1221) |
18 |
| 78 |
20 |
||||
| 112 |
26 |
1)정량이온
3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
4) 표준품의 크로마토그램
| |
그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
이미다클로프리드(A: 4.6분),이미다클로프리드 우레아(B: 4.4분),이미다클로프리드 올레핀(C: 4.3분),5-히드록시이미다클로프리드(D: 4.4분),6-클로로니코틴산(E: 4.5분)
5) 정량한계
0.01 mg/kg
사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 이미다클로프리드 및 각 대사산물을 확인한다.
