8.3.96 노시헵타이드(Nosiheptide)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출 하고, C18분말로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 노시헵타이드 표준품을 정밀히 달아0.1% 개미산 함유 메탄올 용액에 녹여 100 mg/L이 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

마) 표준용액: 100 mL 용량플라스크에 표준원액을0.1% 개미산 함유 메탄올 용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 4 g과 아세토니트릴 15 mL를 가하여 15분간 진탕한 후, 2,000 G에서 10분간 원심분리한다. 새로운 원심분리관에 상층액을 취한 후 C18분말 500 mg을 첨가하여 분산시킨 후 30 초간 진탕한다. 2,000 G로 5분간 원심분리한 후 상층액 6mL를 새로운 원심분리관에 취하여 50℃에서 질소농축한다. 0.1% 개미산 함유메탄올 용액 0.4 mL를 가한 뒤 0.2 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼： C18(Kinetex, 2.1 × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가)이동상 A: 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B: 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	55	45
12	25	75
12.1	5	95
17	5	95
17.1	55	45
20	55	45

(3) 유속: 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도: 45℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI (Positive)

(2) Capillary Temperature: 250℃

(3) Collision gas: Ar (아르곤)

(4) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)1	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
노시헵타이드 (Nosiheptide)	10.1	1222.4	1222.2	238.9	55
				169.8	49
				188.2	44

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤20 %
> 20 %∼≤ 50 %	≤25 %
> 10 %∼≤ 20 %	≤30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 노시헵타이드 표준품의 크로마토그램(10.1분, 0.01 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

노시헵타이드(Nosiheptide) : 0.005 mg/kg