8.3.110 플루랄라너

1) 시험법 적용범위

가금류고기 및 알에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 대상성분을 1% 아세트산 포함 아세토니트릴로 추출하고, 원심분리하여 상층액을 취해 PSA(primary secondary amine), C18및GCB(Graphitized carbon black)를이용하여정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 :표준품을 메탄올에 녹여 200 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 :표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

마) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체를 균질화한 후 5 g을 정확히 달아50mL 용량 원심분리관에넣고 1% 아세트산이함유된 아세토니트릴 15 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. 원심분리관에무수황산마그네슘 6 g과 무수아세트산나트륨 1.5 g을차례로 가하고10분간 격렬하게 진탕한 후4℃, 4,000G에서 10분간 원심분리한다.

나) 정제

새로운15 mL 용량 원심분리관에무수황산마그네슘 1,200 mg, C18400 mg, PSA 400 mg과 GCB 45 mg을 넣고‘가)추출’로부터 얻은 용액 중 상징액 6mL를넣고 1분간 격렬하게 진탕한 후4℃, 4000G에서 10분간 원심분리한다.상징액 중 3 mL를취하여질소 기류 하에서 농축, 건고한 후 잔류물에메탄올을1 mL를 가하여 재용해한다. 추출액을 멤브레인필터(nylon 재질, 0.2μm)로 여과하여 시험용액으로한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 분석조건

(1)칼럼 : C18(Imtakt, Cadenza ®CD, 2.0 mm i.d. × 50 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 메탄올

(나) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 아세트산암모늄 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	5	95
3.0	90	10
7.0	90	10
7.1	5	95
12.0	5	95

(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/분

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 분석조건

(1) 이온화 방법 :
ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 320℃

(3) Capillary voltage : 3.7 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	Exact mass	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collisionenergy, eV)
플루랄라너(Fluralaner)	7.14	556.3	555.06	556	400	24
					160	38
					132	46

※밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

다) 검량선 작성

농도별 표준 용액을 일정량 취하여 무처리 시료 추출 용액과 각각혼합한 후액체크로마토그래프-질량분석기에각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여검량선을 작성한다.

닭고기 (7.15분)

달걀 (7.15분)

그림. 표준용액의크로마토그램(각 0.01 mg/L)

라) 표준품의 크로마토그램

마) 정량한계

플루랄라너 : 0.005 mg/kg

7) 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여그 비율은주1)과일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

8) 정량시험

확인시험과 똑같은 조건에서 음성검체(Blank sample)에 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 희석배수를 고려하여 정량한다.