4.4.2 시액

1) 멸균인산완충희석액(Butterfield's Phosphate Buffered Dilution Water)

인산이수소칼륨(KH2PO4) 34 g을 증류수 500 mL에 용해하고 1N 수산화나트륨 175 mL를 가해 pH를 7.2로 조정하고 여기에 증류수를 가하여 1,000 mL로 하여 인산완충용액으로 한다. 이것을 121℃에서 15분간 멸균한 다음 냉장고에 보존한다. 사용시에는 이 원액 1 mL를 취하여 멸균증류수 800 mL에 가하여 희석하고 이것을 멸균인산완충희석액으로 한다.

2) 멸균생리식염수(Saline)

Sodium Chloride 8.5 g에 증류수를 가하여 1,000 mL로 하고 121℃로 15분간 멸균한다.

3) 뉴-만 염색액

테트라클로로에탄(Tetrachloroethane) 40 mL와 에탄올(Ethanol)을 삼각플라스크에 취하고 70℃까지 가온한 후 여기에 메틸렌블루(Methylene blue) 1.0～2.0 g을 가하여 진탕 혼합하여 색소를 용해시킨 다음 냉각시킨다. 여기에 빙초산(glacial acetic acid) 6 mL를 천천히 가한 후 여과시켜 냉암소에 밀봉 저장한다. 염색액을 조제하여 시일이 경과한 것이나 또는 침전물이 생성된 것은 사용해서는 안 된다.

4) BTB-MR 지시약

Bromthymol Blue0.2 g

Methyl Red0.1 g

위의 성분을 95% 에탄올 300 mL에 용해한 후 정제수 200 mL을 혼합한다.

5) 젤라틴 인산완충용액

Gelatin2 g

Disodium Phosphate4 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 6.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

6) Nitrite 지시약

가) A시약：Sulfanilic acid 1 g에 5N acetic acid 125 mL를 가하여 제조한다.

나) B시약：N-(1-naphthyl)ethylene dihydrochloride 0.25 g에 5N acetic acid 200 mL를 가하여 제조한다.

다) 5N acetic acid ; 빙초산(glacial acetic acid) 28.75 mL에 증류수 71.25 mL를 가하여 제조한다.

A시약 0.5 mL와 B시약 0.2 mL를 각각 반응액에 첨가한 후 관찰결과 적색-보라색을 띄면 양성으로 판정하며, 만일 반응이 없으면 Zn을 소량 첨가하여 색의 변화가 없으면 이를 양성으로 판정한다.

7) 펩톤식염완충액
(Buffered Peptone Water)

Peptone10 g

Sodium Chloride5 g

Disodium Phosphate3.5 g

Monopotassium Phosphate1.5 g

위의 성분을 증류수 1000 mL에 가하여 pH를 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 고압 멸균한다.

8)난황액

달걀을 1시간 가량 0.1% Mercury Chloride(HgCl2)에 담근 후 꺼내 70% ethanol에 30분 가량 담궈 놓는다. 달걀을 꺼내 노른자만 취한 후 동량의 멸균생리식염수를 가하여 사용한다.

9) 0.1% Peptone solution

Peptone1.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.0 ± 0.2 로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다.

10) Ninhydrin 용액

Ninhydrin 3.5 g을 acetone과 butanol을 1:1로 혼합한 용액 100 mL로 용해하여 사용하며, 냉장보관한다.

11) Ziehl-Neelsen 염색액

(1) Saturated Alcoholic Basic Fuchsin(Stock Solution)

95% Ethyl alcohol 100 mL

Basic fuchsin 3 g

(2) Basic Fuchsin(Working Solution)

Saturated Alcoholic Basic Fuchsin 10 mL

5% Phenol 90 mL

(3) Acid Alcohol

Hydrochloric acid 3.2 mL

95% Ethyl alcohol 97 mL

(4) Brilliant Green Counter stain

Brilliant green 1 g

0.01% NaOH 100 mL

12) 루골솔루션((iodine/potassium iodide solution)

100 g의 potassium iodide을 200∼300 mL의 물에 섞은 후, 50 g의 iodine을 넣고 녹을 때까지 가열해 주어 제조한 후 1 L의 멸균증류수에 넣어 빛이 차단된 용기에 보관한다.