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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.3 축·수산물의 잔류물질 ▶ 7.3.2 단성분 시험법 (Individual residue method) ▶ 7.3.2.18 피디플루메토펜(Pydiflumetofen)
  • 7.3.2.18피디플루메토펜(Pydiflumetofen)

    가. 시험법 적용범위소고기, 소지방, 소부산물, 유, 알 등 축산물에 적용한다.

    나. 분석원리시료를 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

    다. 장치

    1) 액체
    크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

    라. 시약 및 시액

    1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

    2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

    4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

    5) d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction): 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 아세트산나트륨(C 2H3NaO2, sodium acetate), 흑연화탄소(GCB, Graphitized Carbon Black), C 18(octadecyl bonded silica ), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

    6) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

    마. 시험용액의 조제

    1) 추출
    균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다. ★여기에 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 10 mL를 가한 뒤 5분간 강하게 흔든 후, 무수황산마그네슘 6 g, 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 5분간 강하게 흔들고, 4℃, 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. ※ 지방에 기준 설정된 시료의 경우 : 균질화한고기류 30~50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 취하고 무수황산나트륨 약 50 g을 넣어 흔들어 섞는 다. 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 넣어 5분 동안 추출 후 여과보조제(Celite 545)를 깔은 부흐너깔때기에서 감압여과 한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여과액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하의 감압에서 용매를 날린 후 정밀히 달아 ★ 이하 추출 과정을 따른다. 시료가 지방인 경우 적당량을 취하여 약 50℃로 가열하여 지방을 분리한 후 건조여과지 로 여과한 것을 정밀히 달아 ★ 이하 추출 과정을 따른다.

    2) 정제
    무수황산마그네슘 1,200 mg과 흑연화탄소 45 mg, 1차 2차 아민 400 mg, C 18400 mg이 담긴 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴 층 전량을 넣고 5분간 강하게 흔들고 이를 4℃, 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm) 로 여과한 후 시험용액으로 한다.

    바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프 분석조건

    가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

    나) 컬럼 온도 : 40℃

    다) 이동상

    (1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

    (2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

    (3) 농도구배조건

    시간(분)

    이동상 A(%)

    이동상 B(%)

    0.0

    30

    70

    1.0

    30

    70

    3.5

    90

    10

    4.0

    90

    10

    4.1

    30

    70

    8.0

    30

    70

    라)이동상 유속 : 0.3 mL/분

    마)주입량 : 5 μL

    2) 질량분석기 분석조건

    가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

    나) Capillary voltage : 5.5 kV

    다) Collision gas : 질소(N2)

    라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

    분석 성분

    (Compound)

    머무름 시간

    (분)

    분자량

    (MW)

    관측질량

    (Exact mass)

    선구이온

    (Precusor

    ion,m/z)

    생성이온

    (Product

    ion,m/z)

    충돌에너지

    (Collision energy, eV)

    피디플루메토펜

    (Pydiflumetofen)

    5.08

    426.7

    425.0

    426

    1931)

    51

    171

    25

    166

    37

    1)정량이온

    3) 검량선 작성
    표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

    4) 표준품 크로마토그램

    그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

    피디플루메토펜 표준품(5.1분)

    * 분석기기 : LC(SHISEIDO® Nanospace Nasca 2 system), MS/MS(AB Sciex® Triple Quad 4500),

    컬럼(XBridgeⓇ C18, 2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm)

    5) 정량한계
    0.003 mg/kg

    사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

    아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 피디플루메토펜을 확인한다.