7.3.2.9 포레이트(Phorate)

가. 시험법 적용범위축산물 등에 적용한다.(알은 제외한다.)

나. 분석원리시료 중 포레이트 및 대사산물 5종*을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여액체크로마토그래프로 분석한다.*대사산물 5종 : 포레이트 설폰(phorate sulfone), 포레이트 설폭사이드(phorate sulfoxide), 포레이트 옥손(phorate oxon), 포레이트 옥손 설폰(phorate oxon sulfone), 포레이트 옥손 설폭사이드(phorate oxon sulfoxide)

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 포레이트 및 대사산물 5종의 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하여 1% 아세트산함유아세토니트릴을 15 mL를 가한 뒤 1분간 강하게 흔든 후, 무수황산마그네슘 6 g과 무수아세트산나트륨 1.5 g을 차례로넣고 10분간흔들어 섞는다.흔들어 섞은 후,추출물을 4℃, 4000G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 취해 새로운 원심분리관에 옮긴다. 남아있는 시료에 1% 아세트산함유아세토니트릴 5 mL를 추가로넣어10분간 강하게 흔들어 섞고 4℃, 4000G에서 10 분간 원심분리한 후 상층액을 취해 앞의 추출물과 합친다. 합친 추출물은 -20℃ 이하에서 30분간 방치한 후 -4℃, 4000G에서 10분간 원심분리한다. 상층액 전액을 무수황산마그네슘 1,200 mg, C18400 mg 및 1차 2차 아민 400 mg이 미리 담겨져 있는 50 mL 원심분리관에 옮긴 후 1분간 강하게 흔들고 이를 4℃, 4000G에서 10분간 원심분리한다. 정제된 상층액 중 절반을 취하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 다음 5 mM 아세트산암모늄함유메탄올을넣어최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가)컬럼 : C18(2.1 mm × 50 mm, 1.7μm) 또는 이와 동등한 것

나)컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 5 mM 아세트산암모늄
함유 물

(2) 이동상 B : 5 mM 아세트산암모늄
함유메탄올

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0	95	5
4.5	95	5
6	0	100
8	0	100
8.1	95	5
10	95	5

라) 이동상 유속 : 0.25 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 : ESI positive-ion mode

사) Cone voltage : 20 V

아) 분자량 범위 : 50～650m/z

자)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성 이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
포레이트 (Phorate)	260.4	261	751)	10
			199	10
포레이트 설폰 (Phorate sulfone)	292.4	293	97	20
			115	20
			1711)	10
포레이트 설폭사이드 (Phorate sulfoxide)	276.4	277	97	20
			1431)	17
			171	17
포레이트 옥손 (Phorate oxon)	244.3	245	751)	10
			155	10
포레이트 옥손 설폰 (Phorate oxon sulfone)	276.3	277	97	17
			127	17
			1551)	10
포레이트 옥손 설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide)	260.3	261	97	20
			1111)	10
			153	20

1)정량이온

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.

(A) 포레이트(6.9분), (B) 포레이트 설폰(6.6분), (C) 포레이트 설폭사이드(6.6분),

(D) 포레이트 옥손(6.6분), (E) 포레이트 옥손 설폰(6.1분), (F) 포레이트 옥손 설폭사이드(6.2분)

4) 정량한계
0.004 mg/kg(유는 0.008 mg/L)

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성 이온으로 포레이트 및 대사산물 5종을 확인한다.