8.3.22엔라마이신(Enramycin)

1) 시험법 적용범위
축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
시료중 엔라마이신을 아세토니트릴로 추출하고 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 표준품(엔두라시딘)을 메탄올에 녹여 조제한 용액을 표준원액으로 한다.

라) 표준용액: 표준원액을잔류허용기준 또는 검출에 적합한 농도가 되도록 이동상으로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2):500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아물로 녹여 표시선까지 채운다.

바) 강 양이온교환 폴리머 카트리지(Strong Cation-exchange Polymer Cartridge):X-C(Styrene- divinylbenzene Polymer surfaced with a Strong Cation Exchanger Group) 또는MCX(Mixed mode Cation Exchange)카트리지(60 mg, 3 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약: 특급또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제
균질화한시료2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 넣고완전히 혼합한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리한다. -20℃에서 30분간 방치하고 상층액 6 mL를 시험관에 옮기고 50℃ 이하에서 질소농축한 후,잔류물은0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 1 mL에 녹여 추출액으로한다. 미리 메탄올 5 mL와 물 5 mL로 활성화시킨 카트리지에 추출액을 흡착시키고 2% 포름산수용액 3 mL로 4회유출시켜 버린 후, 메탄올 2 mL 및 5% 수산화암모늄 함유 메탄올2 mL로용출하여 받는다.용출액은40℃ 이하에서 질소농축하고잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인후멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 조건

(1)컬럼: C8(2.0 mm × 50 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A:0.1% 포름산 함유 5% 아세토니트릴

(나) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	100	0
3.0	100	0
4.0	80	20
10.0	10	90
12.0	10	90
13.0	100	0
18.0	100	0

(3) 유속: 0.4 mL/분

나) 질량분석기 조건

(1) Ionizationmode: ESI(positive)

(2) Spray voltage: 5 kV

(3) Capillary temperature: 280℃

(4) Sheath gas: N2(질소)(50 psi)

(5) Auxiliary gas: N2(질소)(10 psi)

(6) SIM ion:m/z786

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 질량분석기에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간 (retention time)을 비교하고 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시료 중 엔라마이신의 함량을 구한다.