리파아제

Lipase

 

정    의  이 품목은 Aspergillus niger 및 그 변종, Aspergillus oryzae 및 그 변종, Candida rugosa, Rhizopus oryzae의 배양물, Rhizomucor miehei의 리파아제 유전자가 삽입된 Aspergillus oryzae의 배양물, Thermomyces languinosus의 리파아제 유전자가 삽입된 Aspergillus niger의 배양물, Fusarium oxysporum의 리파아제 유전자가 삽입된 Aspergillus oryzae의 배양물, Thermomyces languinosus의 리파아제 유전자가 삽입된 Aspergillus oryzae의 배양물, Candida antarctica의 리파아제 유전자가 삽입된 Aspergillus niger의 배양물, 동물의 췌장조직, 동물의 전위에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

  이 품목은 트리글리세라이드를 가수분해하여 모노 또는 디글리세라이드, 글리세롤 및 지방산을 생성한다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  (4) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라균시험법에 따라 시험할 때, 음성(—)이어야 한다.

  (5) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

활성시험법(역가)

  분석원리 : 본 역가시험은 트리부티린(Tributyrin) 기질의 가수분해를 촉진하는 비율을 전위차적정으로 측정하는데 근거를 두고 있다.

  시험용액의 조제 : 검체 일정량을 취하여 1mL당 2,000～5,000 Lipase units를 함유하도록 글리신완충액으로 희석한 다음 다시 이 용액을 물을 사용하여 최종 희석액 1mL가 0.5～1.5 Lipase units를 함유하도록 시험용액을 조제한다.

  시험조작 : 미리 적정장치의 뷰렛에는 0.05N 수산화나트륨용액을 넣고 기구의 눈금조정을 한 후 온도는 30℃, pH는 7.0으로 맞춘다. 기질유화액 15.0mL를 취하여 적정기의 반응용기에 넣고 교반자석을 넣는다. 이 반응용기를 적정기에 장치한 다음 시험용액 1.0mL를 가해 주고 적정기를 가동시키며 0.05N 수산화나트륨용액으로 pH 7.0으로 맞추면서 반응시키고 이 때 0.05N 수산화나트륨용액의 소비 mL에 대한 분당 적정곡선을 작성한다.

(※ 주 : 5분간 적정 시 기록계에 나타난 반응속도는 직선이어야 한다)

  다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

 

역가(LU/g) =	R × N × 1,000
	W

 

R : 직선구간에서의 분당 적정소비 mL수(mL/min)

N : 수산화나트륨용액의 규정도

1,000 : 산의 mmol을 μmol로 변환시키는 계수

W : 시험용액 1mL에 함유된 검체의 양(g)

  역가의 정의 : 1 Lipase unit(LU)는 상기시험조건 하에서 기질로부터 분당 1μmol의 부티린산(butyric acid)를 유리시키는 효소의 양이다.

  시   액

    유화액 : 염화나트륨 17.9g 및 제일인산칼륨 0.41g을 물 400mL에 녹이고 글리세롤 540mL를 격렬하게 흔들어 주면서 아라비아검(Sigma사 또는 이와 동등한 것) 6.0g을 가해준 다음 녹을 때까지 흔들어주고 물을 가해서 1,000mL로 한다.

    글리신완충액(0.1M) : 글리신 7.5g 및 수산화나트륨 3.8g을 물 900mL에 녹이고 pH를 10.8로 조정한 다음 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    기질유화액 : 트리부티린(Sigma사 또는 이와 동등한 것) 15.9mL를 고속혼합기에 넣고 유화액 50mL 및 물 235mL를 가해준 다음 고속에서 15분간 혼합한다. 사용 전에 30℃항온수욕조에서 최소 15분간 평형 시킨 후 사용한다. 이 용액은 4시간 이내에 사용한다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.