말토트리오히드로라아제

Maltotriohydrolase

G3생성효소

 

정    의  이 품목은 Microbacterium imperiale의 배양물에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

  이 품목은 전분 등을 가수분해하여 말토트리오스를 생성한다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  (4) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라균 시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (5) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

활성시험법(역가)

  시험용액의 조제 : 검체 일정량을 취하여 1mL당 0.2～0.85 Unit를 함유하도록 염화칼슘ㆍ초산완충액(pH 6.0)으로 희석한다.

  시험조작 : 기질용액 0.5mL와 염화칼슘ㆍ초산완충액(pH 6.0) 0.4mL를 50mL 메스플라스크에 넣고 40±0.5℃ 수욕조에 10분간 항온시킨다. 시험용액 0.1mL를 정확히 가하고 흔들어 혼합한 후 수욕조에 방치한다. 정확히 15분 후 알칼리성동용액 1mL를 가하여 잘 혼합하고 밀봉하여 끓는 수욕조에서 정확히 20분간 가열한 다음 즉시 식혀준다. 이 액에 비소ㆍ몰리브덴산암모늄용액 1mL를 가하여 아산화동의 적색침전이 완전히 용해될 때까지 잘 흔들어 섞어주고 실온에서 20분간 방치한 다음 물을 가하여 25mL로 하고 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 520nm에서 흡광도(AS)를 측정한다. 따로 효소공시험용으로 기질 0.5mL와 염화칼슘ㆍ초산완충액(pH 6.0) 0.4mL를 혼합한 액에 알칼리성동용액 1mL를 가하여 잘 혼합한 후 시험용액 0.1mL를 가해주고 시험용액과 동일한 조작을 하여 흡광도(AB)를 측정한다.

  검량선의 작성 : 미리 105℃에서 6시간 건조한 포도당 1.0g을 정밀히 달아 물을 가하여 100mL로 한다. 이 액을 1.0mL, 2.0mL, 3.0mL, 4.0mL, 5.0mL를 각각 취하여 물을 가하여 100mL씩으로 한다. 이 액 1mL는 0.1mg, 0.2mg, 0.3mg, 0.4mg, 0.5mg의 포도당을 함유한다. 각 포도당 표준용액 1mL를 50mL 네슬러관에 넣고 알칼리성동용액 1mL를 가하여 잘 혼합하고 밀봉하여 끓는 수욕조에서 정확히 20분간 가열한 다음 즉시 식혀 준다. 각 액에 비소ㆍ몰리브덴산암모늄용액 1mL를 각각 가하여 아산화동의 적색침전이 완전히 용해될 때까지 잘 흔들어 섞어 주고 실온에서 20분간 방치한 후 물을 가하여 25mL로 한다. 이것을 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 520nm에서 흡광도를 측정하고 포도당 양(mg)에 대한 흡광도로 검량선을 작성한다.

    다음의 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

 

역가(units/g) =	(AS - AB) × F	×	1	×	1.0	×	1	×	N
			15		0.1		0.180		W

 

F : 흡광도차가 1.0일 때의 포도당 양(mg)으로 검량선에서 구함

15 : 반응시간(분)

0.1 : 시험용액의 양(mL)

0.180 : 포도당 1μmol에 대한 계수(포도당 1μmol = 0.180mg)

N : 시험용액의 희석용량(mL)

W : 검체의 채취량(g) 

 

  역가의 정의 : 1 Maltotriohydrolase unit는 상기시험조건 하에서 분당 1μmol의 포도당에 상당하는 환원당을 생성하는 효소의 양이다.

  시   액

    기질용액 : 가용성 전분 1.0g을 달아 물 10mL에 분산시켜 끓는 물 50mL에 서서히 가하고 저으면서 5분간 끓여 식힌 다음 물을 가하여 100mL로 한다.

    염화칼슘․초산완충액(pH 6.0) : 무수 염화칼슘 5mM을 함유하는 0.1M 초산용액과 무수 염화칼슘 5mM을 함유하는 0.1M 초산나트륨용액을 조제한다. 이 두 액을 혼합하여 pH 6.0으로 조절한다.

    알칼리성용액 : 무수황산나트륨 200g, 무수탄산나트륨 25g, 탄산수소나트륨20 g, 주석산칼륨나트륨 25g을 물에 녹이고 1,000mL로 한다.

    동용액 : 황산동 30g을 150mL 물에 녹이고, 황산을 4방울 떨어뜨린 후 물을 가하여 200mL로 한다.

    알칼리성동용액 : 알칼리성용액 25mL와 동용액 1mL를 혼합하여 조제한다. 사용 시 조제한다.

    비소․몰리브덴산암모늄 용액 : 비산수소이나트륨(7수화물) 3g에 물 25mL를 가하여 녹인다. 몰리브덴산암모늄(4수화물) 25g을 물 450mL에 녹인 다음 황산 21mL를 가해준다. 비산수소이나트륨용액을 몰리브덴산암모늄용액에 교반하면서 천천히 가하여 혼합해 주고 37℃에서 24시간 방치한 다음 갈색병에 넣고 사용한다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.