트립신

Trypsin

 

정    의   이 품목은 돼지, 소의 췌장 추출물에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

  이 품목은 단백질, 아미드 및 에스테르류 중 L-아르지닌 또는 L-라이신의 카복실기 결합 부위를 가수분해하여 저분자량의 펩타이드를 생성한다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  (4) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라균 시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (5) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

활성시험법(역가)

  시험용액의 조제 : 검체를 0.001N 염산에 녹여 최종희석액 1mL가 약 3,000 Trypsin units를 함유하도록 조제한 다음 다시 이 용액을 일정량씩 취하여 0.001N 염산으로 0.2mL당 12, 18 및 24 Trypsin units를 함유하도록 조제한다. 이 용액은 다음의 시험조작에 따라 사용된다.

  시험조작 : 시험은 분광광도계의 셀 부위의 온도가 25±0.1℃가  되게 유지시켜 행한다. 반응셀에 온도계를 장치하여 흡광도 측정전과 측정후의 온도차가 0.5℃이하인가를 확인하여야 한다. 0.001N 염산 0.2mL와 기질용액 3mL를 취하여 1cm셀에 넣는다. 이를 분광광도계에 장치하고 253nm에 흡광도가 0.050되게 조절한다. 또 다른 셀에 12 units를 함유하는 시험용액 0.2mL를 정확히 가한다. 이에 기질용액 3mL를 가하고 셀은 분광광도계에 장치한다. 5분동안 30초 간격으로 흡광도를 측정한다. 18 및 24 Trypsin units를 함유하는 표준용액에 대해서도 같은 조작을 하여, 각 농도의 시간에 대한 흡광도의 곡선을 그린다. 단, 곡선이 일직선인 것의 값만 사용한다. 굴곡에서 얻은 값은 버리고 실제의 트립신역가로서 3개의 농도에서 얻은 결과의 평균을 취한다.

      다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

역가(units/mg) ＝ (A₁—A₂)/(T × W × 0.003)
 

A₁ : 일직선상에서 최후의 흡광도

A₂ : 일직선상에서 최초의 흡광도

T : 최초와 최후의 시간차(분)

W : 흡광도 측정에 사용된 시험용액중의 Trypsin 양(mg)

 

    역가의 정의: 1 Trypsin unit은 상기시험조건 하에서 분당 0.003 흡광단위를 변화하는 효소의 양이다.

  시   액

M 인산염완충액(pH 7.6) : 인산일칼륨 4.54g을 충분한 양의 물에 녹여 500mL로 한다. 따로, 인산이나트륨(무수) 4.73g을 충분한 양의 물에 녹여 500mL로 한다. 인산일칼륨액 13mL와 인산이나트륨액 87mL를 혼합한다.

   기질용액 : 트립신분석용N-벤조일-L-아르지닌에틸에스테르염산염(N-benzoyl-L-arginine ethyl ester hydrochloride) 85.7mg을 물에 녹여 100mL로 한다(※주 : Trypsin reference standard를 사용하여 기질의 적합성 및 분광광도계의 조절을 점검한다). 이 용액 10mL를 취하여 pH 7.6인 인산염완충액을 사용하여 100mL로 한다. 액층 1cm, 파장 253nm에서 물을 대조액으로 25±0.1℃에서 이 용액의 흡광도를 측정한다. 필요하면 인산염완충액을 사용하여 흡광도가 0.575～0.585 범위에 오도록 조절한다. 이 용액은 조제 후 2시간이내에 사용하여야 한다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.